發(fā)布時間：2018-05-16 08:10

  本文選題：聚乙二醇-聚已內(nèi)酯 + PSMA配體��； 參考：《吉林大學》2015年博士論文

【摘要】：當前國內(nèi)外對膠束納米制劑的研究越來越多，與傳統(tǒng)制劑相比其優(yōu)勢很多，但由于其不能達到特定部位實現(xiàn)藥物的傳遞，使其不能充分發(fā)揮真正的功效，因而存在一定的局限性。主動靶向膠束傳遞系統(tǒng)則可在親水表面引入一個配體，通過特異性作用結(jié)合到受體上，從而提高腫瘤細胞內(nèi)的藥物濃度，充分發(fā)揮膠束的特點治療癌癥。 本文首先合成一種PSMA的小分子配體（SMLP），并使用質(zhì)譜分析（massspectrometry，Ms）、氫核磁共振（H-nuclear magnetic resonance，1H NMR）技術(shù)進行了結(jié)構(gòu)確證和表征。SMLP配體能與前列腺特異性膜抗原通過高效的氫鍵作用結(jié)合，并以PSMA蛋白為受體靶向到前列腺癌細胞表面。在這個前提下，我們利用開環(huán)聚合反應(yīng)合成了一系列的PCL-mPEG和PCL-PEG-COOH共聚物，并用傅里葉變換紅外光譜（fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR）、氫核磁共振、凝膠滲透色譜（gel permeation chromatography，GPC）等分析手段對共聚物進行了結(jié)構(gòu)確證與表征。氫核磁共振分析表明PCL-b-PEG共聚物的嵌段比例具有可控性，凝膠滲透色譜分析結(jié)果表明聚合物分子量分布窄(PDI均小于1.2)。最后，用NHS酯活化聚合物PCL-PEG-COOH上的羧基，制備聚合物PCL-PEG-NHS，再將小分子SMLP以生物共軛的方式連接到聚合物PCL-PEG-NHS上，成功地合成了聚合物PCL-PEG-SMLP。并通過紅外光譜、氫核磁共振對產(chǎn)物進行了結(jié)構(gòu)確證。 以一系列共聚物PCL-mPEG和PCL-PEG-SMLP為載體材料，以多烯紫杉醇（DTX）為模型藥物，利用薄膜水化輔以超聲分散法進行了制備載藥膠束的研究。對水化時間、超聲時間、聚合物疏水嵌段長度等處方因素進行了詳細的考察與篩選。研究結(jié)果表明：薄膜分散法制備的載藥膠束粒徑在150nm左右，并且粒徑分布較寬；載藥量最高的一組膠束為PCL12k-mPEG5k（8.9±0.7%）和PCL12k-PEG5k-SMLP（9.1±0.5%）。隨后，以DTX為模型藥物，進行了透析法制備載藥膠束的研究。隨著疏水鏈段分子量的增加，載藥量也逐漸的增加。最高載藥量的一組膠束DTX-PCL12k-mPEG5k(DTX-PMs1)和DTX-PCL12k-PEG5k-SMLP（DTX-PMs2）載藥量分別為8.2%和8.4%。通過動態(tài)光散射測出一系列膠束平均粒徑均小于55nm并且粒徑分布（PDI）均小于0.05，這與透射電鏡圖片得出的結(jié)果一致。透析法與薄膜水化-超聲分散法制備出的膠束相比，在載藥量上差異很小。但透析法制備的膠束平均粒徑更小，粒徑分布更窄，并且制備膠束工藝流程簡單，而薄膜水化-超聲分散法制備膠束工藝流程相對復(fù)雜且易受多種因素影響。因而本文選取透析法作為制備膠束的工藝方法。通過短期載藥穩(wěn)定性實驗發(fā)現(xiàn)：與其它載藥膠束相比，DTX-PMs1和DTX-PMs2為載藥穩(wěn)定性最好的一組。以芘熒光探針法對一系列聚乙二醇-聚已內(nèi)酯共聚物的臨界聚集濃度進行了測定與比較，結(jié)果表明這些聚合物均具有較強的自組裝趨勢（CAC在0.1-0.6mg/L），但PMs1和PMs2的CAC值最低，與其它膠束相比具有更高的熱力學穩(wěn)定性。通過載藥量、短期穩(wěn)定性評價以及CAC值的大小，最終確定DTX-PMs1和DTX-PMs2為一組最優(yōu)化處方。在體外釋放研究中，對不同pH值釋放介質(zhì)中的DTX-PMs1和DTX-PMs2釋放度進行比較。在pH7.4的釋放介質(zhì)中，DTX-PMs1和DTX-PMs2在72h內(nèi)釋放約80%所載的藥物，與Taxotere相比具有良好的緩釋效果；而在pH5.5的釋放介質(zhì)中，DTX-PMs1和DTX-PMs2釋放速率略有加快，這有助于載體在腫瘤細胞處更快地釋放藥物（酸性環(huán)境）。 在體外的靶向性研究中，在聚合物濃度50-500μg/mL的范圍內(nèi)，空白膠束PMs1（非靶向膠束）和PMs2（靶向膠束）對LNCaP細胞無明顯毒性，，說明了膠束具有良好的生物相容性并且SMLP對細胞毒的測定無干擾。體外細胞毒實驗的研究結(jié)果表明：分別將DTX-PMs2與DTX-PMs1在LNCaP細胞中孵育48h和72h后，兩者的IC50值存在顯著性差異(48h:0.87±0.27vs13.48±1.03μg/mL;72h:0.02±0.008vs1.35±0.54μg/mL)，這說明DTX-PMs2在SMLP的牽引下，有效地到達了作用部位，實現(xiàn)了靶向治療。為了進一步證明載藥膠束DTX-PMs2的靶向性，進行了細胞攝取實驗，研究結(jié)果表明：同樣聚合物濃度的PMs2與PMs1裝載著等量的香豆素-6，在LNCaP中孵育4h后，前者的熒光強度比后者高出5倍。這些研究的結(jié)果均表明基于PEG-PCL-SMLP的新型靶向納米藥物傳遞系統(tǒng)顯示了治療前列腺癌的巨大潛力。
[Abstract]:Compared with the traditional preparation , the invention has the advantages of more and more research on the micelle nano - preparations at home and abroad , and has a certain limitation due to the fact that the invention can not achieve the delivery of the drug at a specific site , so that the invention can not fully play the real efficacy , and therefore , the active targeting micelle delivery system can introduce a ligand on the hydrophilic surface , and bind to the receptor by specific action , thereby improving the drug concentration in the tumor cell and fully exerting the characteristics of the micelle to treat cancer .

A series of PCL - mPEG and PCL - PEG - COOH copolymers were synthesized by means of FT - IR , 1H NMR and gel permeation chromatography .

In this paper , a series of copolymer PCL - mPEG and PCL - PEG - SMLP were used as carrier materials . The preparation of drug - carrying micelle was carried out by means of membrane hydration and ultrasonic dispersion . The results showed that the particle size of carrier micelle prepared by membrane dispersion was about 150 nm , and the particle size distribution was wide .
A series of micelle DTX - PCL12k - mPEG5k ( DTX - PMs1 ) and DTX - PCL12k - PEG5k - SMLP ( DTX - PMs2 ) prepared by dialysis were studied .
However , in the release medium of pH 5.5 , the release rate of DTX - PMs1 and DTX - PMs2 is slightly increased , which contributes to the faster release of the drug ( acidic environment ) at tumor cells .

In vitro targeting study , there was no obvious toxicity of PMs1 ( non - targeted micelle ) and PMs2 ( targeted micelle ) in the range of polymer concentration of 50 - 500 渭g / mL . The results showed that the IC50 values were significantly different ( 48h : 0.87 鹵 0.27 vs 13.48 鹵 1.03 渭g / mL ; 72h : 0.02 鹵 0.008 vs 13.48 鹵 1.03渭g / mL ; 72h : 0.02 鹵 0.008 vs1 . 35 鹵 0.54 渭g / mL ) . The results of these studies showed that the novel targeting nano drug delivery system based on PEG - PCL - SMLP demonstrated the great potential for treating prostate cancer .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R943

【共引文獻】

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本文編號：1896107