發(fā)布時間：2018-05-08 06:26

  本文選題：脂肪細(xì)胞 + 自噬�。� 參考：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分脂肪細(xì)胞應(yīng)激誘導(dǎo)自噬的作用及機(jī)制研究目的:探討高脂環(huán)境下自噬活性的變化及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系。方法:通過Western blot、免疫熒光、電鏡三種方法檢測棕櫚酸負(fù)荷下分化成熟脂肪細(xì)胞自噬活性的變化;RT-PCR和Western blot方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路,觀察自噬與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生的先后順序,并通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路觀察自噬水平的變化,明確自噬的誘導(dǎo)機(jī)制;通過藥物性抑制自噬,分別用Western blot方法檢測對細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號及MTT法檢測對細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果:棕櫚酸顯著誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞自噬活性的增加,表現(xiàn)為自噬體和自噬溶酶體形成增多,自噬特異性蛋白LC3-II的積累量增多及自噬流的增加;棕櫚酸誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生且先于自噬的激活,并且抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致LC3-II的積累量降低;此外,抑制自噬增加了細(xì)胞對應(yīng)激和凋亡的敏感性。結(jié)論:棕櫚酸激活成熟分化脂肪細(xì)胞的自噬活性增加;自噬的激活部分依賴棕櫚酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑;自噬作為適應(yīng)性反應(yīng)在應(yīng)激環(huán)境下增加細(xì)胞對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞調(diào)亡的抵抗。第二部分自噬對脂肪細(xì)胞的炎癥因子的調(diào)節(jié)作用目的:探討自噬激活對脂肪細(xì)胞炎癥因子的調(diào)節(jié)作用方法:通過免疫組化和RT-PCR方法,觀察飲食誘導(dǎo)肥胖鼠脂肪組織及高脂誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的炎癥表現(xiàn)以及自噬相關(guān)基因的表達(dá),明確炎癥和自噬的水平;分別通過藥物性抑制和si RNA干擾自噬基因的方法阻斷自噬,RT-PCR方法檢測炎癥因子MCP-1和IL-6的表達(dá)水平,明確自噬對炎癥因子的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:飲食誘導(dǎo)肥胖鼠脂肪組織切片的HE染色和CD68免疫組化分析結(jié)果表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞的浸潤增加,RT-PCR方法檢測棕櫚酸誘導(dǎo)分化脂肪細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)水平上調(diào)。肥胖誘導(dǎo)的脂肪組織及棕櫚酸誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞都表現(xiàn)為自噬基因的表達(dá)升高。3-MA自噬特異性抑制和si RNA轉(zhuǎn)染自噬相關(guān)基因Becn1干擾自噬的形成,RT-PCR法檢測MCP-1和IL-6的表達(dá)水平上調(diào)。結(jié)論:在肥胖誘導(dǎo)的脂肪組織和單獨脂肪細(xì)胞的炎癥反應(yīng)中自噬被激活,自噬作為應(yīng)激環(huán)境下的適應(yīng)性機(jī)制參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié),并發(fā)揮抗炎的作用。第三部分雷帕霉素的抗應(yīng)激和抗炎作用及其與自噬活性的關(guān)系目的:探討雷帕霉素的抗應(yīng)激和抗炎作用及其與自噬活性的關(guān)系方法:Western blot方法檢測m TORC1信號下游磷酸化S6K1蛋白表達(dá),觀察棕櫚酸對m TORC1信號的影響,同時驗證雷帕霉素對脂肪細(xì)胞m TORC1信號的抑制作用。分別用雷帕霉素預(yù)處理脂肪細(xì)胞,通過Western blot和RT-PCR方法檢測雷帕霉素對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號蛋白和炎癥因子及炎癥通路NF-κB表達(dá)的影響;并通過藥物性抑制和si RNA干擾自噬的方法進(jìn)一步明確,雷帕霉素對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的作用與自噬的關(guān)系。結(jié)果:棕櫚酸顯著誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞磷酸化S6K1蛋白表達(dá)增加,且可被雷帕霉素所抑制;雷帕霉素顯著下調(diào)棕櫚酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號蛋白的表達(dá),但CQ抑制自噬消除了雷帕霉素的抗應(yīng)激作用;雷帕霉素顯著抑制NF-κB炎癥信號及其介導(dǎo)的炎癥因子MCP-1和IL-6的表達(dá),si Becn1干擾自噬可部分阻斷雷帕霉素的抗炎作用。結(jié)論:棕櫚酸誘導(dǎo)m TORC1信號上調(diào)促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生,雷帕霉素發(fā)揮抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和抗炎的作用,且雷帕霉素的這些有益作用部分依賴自噬途徑的激活。
[Abstract]:The first part of the study on the role and mechanism of autophagy induced by adipocyte stress: To explore the changes of autophagic activity and the relationship with endoplasmic reticulum stress in high fat environment. Methods: the changes of autophagic activity of mature fat cells under palmitic acid load were detected by three methods of Western blot, immunofluorescence and electron microscopy; RT-PCR and Western blot Methods to detect the endoplasmic reticulum stress signal pathway, observe the sequence of autophagy and endoplasmic reticulum stress, and to observe the changes of autophagy by inhibiting the endoplasmic reticulum stress signal pathway and clear the induction mechanism of autophagy. Through the drug inhibition of autophagy, the Western blot method was used to detect the endoplasmic reticulum stress signal and the MTT method, respectively. Results: palmitic acid significantly induced an increase in autophagic activity of mature adipocytes, showing an increase in the formation of autophagosomes and autophagosomes, increased accumulation of autophagic specific protein LC3-II and increased autophagic flow; palmitic acid induced endoplasmic reticulum activation and inhibition of autophagic activation, and inhibition of endoplasmic reticulum. In addition, inhibition of autophagy increases the sensitivity of LC3-II to stress and apoptosis. Conclusion: palmitic acid activates the autophagic activity of mature and differentiated adipocytes, the activation of autophagy is partly dependent on the endoplasmic reticulum stress pathway induced by palmitic acid; autophagy increases in the stress environment as an adaptive response. The resistance of cell to endoplasmic reticulum stress and cell apoptosis. Second the regulation of autophagy to the inflammatory factors of adipocytes: Objective To investigate the regulation of autophagy activation on adipocyte inflammatory factors: the inflammatory expression of fat and high fat induced adipose cells in obese rats was observed by immunohistochemical and RT-PCR methods. And the expression of autophagy related genes, clear the level of inflammation and autophagy; blocking autophagy by drug inhibition and Si RNA interfering autophagy genes, RT-PCR methods to detect the expression level of inflammatory factors MCP-1 and IL-6, and the regulation of autophagy to inflammatory factors. Fruit: HE staining in fat tissue slices of obese rats induced by diet The results of CD68 immunohistochemical analysis showed that the infiltration of inflammatory cells increased, and the expression of palmitic acid induced the expression level of inflammatory factors in differentiated adipocytes was up-regulated by RT-PCR method. Adipose tissue and palmitic acid induced adipocytes were expressed as autophagic gene expression increased by.3-MA autophagy specific inhibition and Si RNA transfected autophagy The autophagy Becn1 interferes with the formation of autophagy, and the expression level of MCP-1 and IL-6 is up regulated by the RT-PCR method. Conclusion: autophagy is activated in the inflammatory response of fat induced adipose tissue and individual adipocytes. Autophagy participates in the regulation of inflammatory response as an adaptive mechanism under stress environment and plays an anti-inflammatory effect. Third part rapamycin The anti stress and anti-inflammatory effects and its relationship with autophagy: To explore the anti stress and anti-inflammatory effects of rapamycin and its relationship with autophagy: Western blot method was used to detect the expression of S6K1 protein in the downstream of M TORC1 signal, and to observe the effect of palmitic acid on M TORC1 signal, and to verify that rapamycin on M TO in adipocytes. The inhibitory effects of RC1 signal were pretreated with rapamycin. The effects of rapamycin on endoplasmic reticulum stress signal protein and inflammatory factors and the expression of NF- kappa B in endoplasmic reticulum were detected by rapamycin and Western blot and RT-PCR, and the methods of drug inhibition and Si RNA to interfere with autophagy were further clarified. Rapamycin should be used for endoplasmic reticulum. Results: palmitic acid significantly induced the increased expression of phosphorylated S6K1 protein in adipocytes and inhibited by rapamycin, and rapamycin significantly downregulated the expression of endoplasmic reticulum stress signal protein induced by palmitic acid, but CQ inhibited autophagy to eliminate the anti stress effect of rapamycin; rapamycin Significant inhibition of NF- kappa B inflammatory signal and its mediated expression of inflammatory factors MCP-1 and IL-6, Si Becn1 interference with autophagy can partially block the anti-inflammatory effects of rapamycin. Conclusion: the up-regulated m TORC1 signal induced by palmitic acid promotes the occurrence of inflammatory response, rapamycin plays the role of anti endoplasmic reticulum stress and anti-inflammatory, and the beneficial effects of rapamycin The activation of autophagy is partly dependent on the autophagy pathway.

【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運動與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報;2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護(hù);激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 李少瑩;自噬在LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 劉冰;腦缺血預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 王存凱;microRNA-30a-5p通過抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

5 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 陳軍童;腎損傷分子1對高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

7 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 王彬彬;模擬高原缺氧大鼠腸上皮細(xì)胞損傷自噬調(diào)控機(jī)制的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 張君莉;NIX在CCCP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞線粒體自噬調(diào)控作用的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

10 校鑫;九節(jié)龍皂苷Ⅰ對多種人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系自噬活性增強(qiáng)作用的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

，

本文編號：1860314