發(fā)布時間：2018-04-11 04:04

  本文選題：對乙酰氨基酚 + 程序性壞死��； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的過量對乙酰氨基酚（APAP）可誘導細胞死亡誘導因子（AIF）依賴性肝細胞死亡，但作用機制還不清楚。本研究探討了在對乙酰氨基酚誘發(fā)小鼠急性肝損傷的過程中，程序性壞死關鍵調(diào)控因子受體相互作用蛋白激酶1（RIP1）在AIF介導肝細胞死亡中的作用。 方法（1）為探討GSH耗竭對APAP誘導肝臟RIP1和RIP3上調(diào)的影響，將小鼠統(tǒng)一禁食12h后進行腹腔注射APAP（300mg/kg），分別在不同的時點（0、1、2和4h）取材，檢測肝臟RIP1與RIP3的水平、GSH含量和腫瘤壞死因子（TNF-α）的mRNA水平。（2）為探討RIP1選擇性抑制劑Nec-1預處理和后處理對APAP誘導急性肝損傷的影響，將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組，在給予APAP前或后30min腹腔注射Nec-1（0.125mg/mouse），分別在4h和24h取材，檢測血清中ALT的水平和肝細胞死亡情況。（3）為探討Nec-1對APAP在肝臟代謝中的效應，將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組、APAP+Nec-1組，在給予APAP前30min進行Nec-1預處理，30min后取材，檢測肝臟的GSH含量和CYP2E1水平。（4）為探討Nec-1對APAP誘導肝臟JNK磷酸化、線粒體Bax和細胞核AIF的轉(zhuǎn)位的影響，將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組，在給予APAP前30min進行Nec-1預處理，4h后進行取材，檢測肝臟的JNK磷酸化水平、線粒體Bax水平和細胞核AIF的轉(zhuǎn)位情況。（5）為探討Nec-1是否通過其抗氧化活性來阻止APAP誘導的肝細胞死亡，將小鼠隨機分為對照組、APAP組、APAP+Nec-1組和APAP+Nec-1+BSO組，在給予APAP前30min，，APAP+Nec-1組進行Nec-1預處理，在給予Nec-1前進行BSO（25mg/kg）預處理，4h后進行取材，檢測血清中ALT的水平、肝臟的3-NT水平、GSH含量、細胞核AIF的轉(zhuǎn)位和肝細胞死亡情況。 結果RIP1選擇性抑制劑Nec-1可阻止APAP誘導的肝細胞死亡，能夠改善小鼠的生存率。肝細胞RIP1的水平在APAP處理1h后顯著升高，且與肝細胞GSH耗竭相關。但是，Nec-1預處理并沒有影響在給予APAP30min后肝臟的GSH水平，且Nec-1預處理并沒有影響到早期肝臟CYP2E1的表達。此外，Nec-1明顯抑制APAP誘導JNK激活，表明JNK是RIP1的下游靶點。Nec-1可明顯抑制APAP誘導胞質(zhì)Bax向線粒體轉(zhuǎn)位。同時，Nec-1完全阻斷APAP誘導的AIF從線粒體向細胞核轉(zhuǎn)位。在Nec-1對細胞內(nèi)GSH水平的作用完全被BSO所取消后，Nec-1仍然能夠阻止APAP誘導的ALT水平的升高，仍明顯地阻止APAP誘導的細胞核AIF的轉(zhuǎn)位和肝細胞死亡。 結論本研究結果表明肝臟RIP1的激活是APAP誘導小鼠急性肝衰竭的早期事件。RIP1選擇性抑制劑Nec-1預處理和后處理均對APAP誘導小鼠急性肝衰竭具有顯著地保護作用。而且，Nec-1抑制APAP誘導的肝臟的JNK的激活和Bax從胞質(zhì)向線粒體的轉(zhuǎn)位。在APAP誘導的急性肝衰竭的過程中，Nec-1抑制AIF調(diào)控的程序性壞死。因此，Nec-1是APAP誘導急性肝衰竭的有效解毒劑。
[Abstract]:Objective excessive acetaminophen (APAP) can induce the death of hepatocytes dependent on AIF-dependent cell death, but the mechanism is not clear.The purpose of this study was to investigate the role of protein kinase 1 (RIP1) in AIF mediated hepatocyte death in paracetamol induced acute liver injury in mice.Methods to investigate the effect of GSH depletion on the up-regulation of liver RIP1 and RIP3 induced by APAP, the mice were given intraperitoneal injection of APP 300 mg / kg at different time points after 12 h fasting, and the samples were collected at different time points (1h and 4h, respectively).In order to investigate the effect of Nec-1 pretreatment and post-treatment on APAP induced acute liver injury, mice were randomly divided into control group (n = 10) and APAP Nec-1 group (n = 10) to detect the level of RIP1 and RIP3 in liver and the mRNA level of TNF- 偽) in order to investigate the effects of Nec-1 pretreatment and post-treatment on APAP induced acute liver injury.Before and after APAP, 30min was injected intraperitoneally with Nec-1n 0.125mg / mouse.The serum ALT levels and hepatocyte death were measured at 4h and 24h, respectively. In order to investigate the effect of Nec-1 on APAP metabolism in liver, mice were randomly divided into control group (Nec-1 group) and APAP Nec-1 group.In order to investigate the effect of Nec-1 on APAP induced JNK phosphorylation, mitochondrial Bax and nuclear AIF translocation, 30min pretreated with Nec-1 for 30 minutes before APAP was used to detect the content of GSH and CYP2E1 level in liver.The mice were randomly divided into control group (Nec-1 group) and APAP Nec-1 group (control group). 30min was pretreated with Nec-1 for 4 hours before APAP. The phosphorylation level of JNK in liver was detected.The level of mitochondrial Bax and the translocation of nuclear AIF. 5) in order to investigate whether Nec-1 can prevent APAP induced hepatocyte death through its antioxidant activity, mice were randomly divided into two groups: control group, APAP Nec-1 group and APAP Nec-1 BSO group.Nec-1 pretreatment was performed 30 minutes before APAP and 25 mg / kg Nec-1 was pretreated for 4 h. The levels of ALT in serum, 3-NT level in liver, nuclear AIF translocation and hepatocyte death were measured.Results Nec-1, a selective inhibitor of RIP1, could prevent hepatocyte death induced by APAP and improve the survival rate of mice.The level of RIP1 in hepatocytes increased significantly after 1 h of APAP treatment, and was related to the depletion of GSH in hepatocytes.However, Nec-1 pretreatment did not affect the level of GSH in the liver after APAP30min, and Nec-1 pretreatment did not affect the expression of CYP2E1 in the early liver.In addition, Nec-1 inhibited the activation of JNK induced by APAP, suggesting that JNK was the downstream target of RIP1. Nec-1 could significantly inhibit the translocation of cytoplasmic Bax to mitochondria induced by APAP.At the same time, Nec-1 completely blocked APAP induced AIF translocation from mitochondria to nucleus.After the effect of Nec-1 on intracellular GSH level was completely cancelled by BSO, Nec-1 could still prevent the increase of ALT level induced by APAP, and still significantly prevent APAP induced nuclear AIF translocation and hepatocyte death.Conclusion the results suggest that the activation of RIP1 in liver is the early event of APAP induced acute liver failure in mice. The pretreatment and post-treatment of Nec-1, a selective inhibitor of RIP1, have a significant protective effect on APAP induced acute liver failure in mice.Moreover, Nec-1 inhibited the activation of JNK and the translocation of Bax from cytoplasm to mitochondria induced by APAP.In the course of acute hepatic failure induced by APAP, Nec-1 inhibits programmed necrosis regulated by AIF.Therefore, Nec-1 is an effective antidote for acute hepatic failure induced by APAP.
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R99

【共引文獻】

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本文編號：1734334