發(fā)布時間：2018-04-08 16:32

  本文選題：青春期小鼠　切入點：睪丸　出處：《安徽醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的探討十溴聯(lián)苯醚對青春期雄性ICR小鼠的生殖毒性作用；探討cAMP信號通路在十溴聯(lián)苯醚暴露青春期雄性ICR小鼠生殖功能損傷中的作用；為建立十溴聯(lián)苯醚的生殖毒性機制的體外研究提供依據(jù)。 方法取健康4周齡雄性ICR小鼠48只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，隨機分為6組。小鼠自由進食、飲水，飼養(yǎng)環(huán)境溫度20-25℃、濕度50%±10%，12h白晝/12h夜晚。隔日染毒1次，連續(xù)染毒7周，染毒結(jié)束后脫頸椎處死動物，冰浴下分離臟器、稱重，保存于-80℃冰箱。稱量小鼠體重、睪丸重、附睪重，進行精子計數(shù)；睪丸組織進行HE染色；ELISA法檢測血清中cAMP含量；放射免疫法檢測小鼠血清中睪酮水平；Western Blot檢測小鼠睪丸組織中bax、bcl-2和CX-43蛋白表達水平。 結(jié)果十溴聯(lián)苯醚暴露7周后，小鼠睪丸形態(tài)、大小發(fā)生變化。十溴聯(lián)苯醚組隨染毒劑量增加，睪丸重量下降，附睪重量下降，十溴聯(lián)苯醚組與NS組相比，睪丸重、附睪重差異有統(tǒng)計學意義。十溴聯(lián)苯醚暴露使小鼠睪丸、附睪重量減輕，睪丸臟器系數(shù)（NS組(0.928±0.152)；DMSO(0.827±0.056)；100mg/kg BW（0.794±0.037）；200mg/kg BW（0.747±0.061）；300mg/kg BW（0.760±0.122）；500mg/kg BW（0.705±0.105））、附睪臟器系數(shù)（NS組(0.226±0.036)；DMSO(0.189±0.016)；100mg/kg BW（0.159±0.025）；200mg/kg BW（0.124±0.046）；300mg/kg BW（0.129±0.050）；500mg/kg BW（0.119±0.040））下降。十溴聯(lián)苯醚影響青春期雄性ICR小鼠精子數(shù)目，與對照組（NS（）165.3±7.4）相比十溴聯(lián)苯醚暴露組（100mg/kgBW：144.7±8.0；200mg/kg BW：93.9±7.1；300mg/kg BW:40.4±8.3；500mg/kgBW:25.6±5.6）（P0.05.）差異有統(tǒng)計學意義，且隨著染毒劑量的升高，各十溴聯(lián)苯醚組小鼠精子數(shù)目下降。本研究采用HE染色法初步檢測睪丸細胞生長發(fā)育情況，由HE染色切片可見十溴聯(lián)苯醚對小鼠睪丸生殖細胞、間質(zhì)細胞及支持細胞均有不同程度的損傷，對照組精子數(shù)目較多，生殖細胞排列緊密規(guī)則，細胞質(zhì)染色較深，胞核明顯；睪丸間質(zhì)細胞排列緊密，形態(tài)完整，染色較深；睪丸支持細胞均勻分布于曲細精管周圍，排列緊密，染色較深。十溴聯(lián)苯醚暴露使小鼠血清cAMP水平明顯降低，且隨劑量升高小鼠cAMP水平降低，具有劑量效應(yīng)關(guān)系，十溴聯(lián)苯醚暴露組中，100mg/kg BW（2.142±0.387nmol/L），200mg/kg BW（1.892±0.299nmol/L），300mg/kg BW（1.725±0.260nmol/L），500mg/kg BW（1.702±0.331nmol/L），小鼠血清cAMP含量呈逐漸下降趨勢，與對照NS組（2.900±0.301nmol/L）相比， P0.05，，差異有統(tǒng)計學意義。十溴聯(lián)苯醚暴露與小鼠血清睪酮水平存在劑量效應(yīng)關(guān)系，且隨著十溴聯(lián)苯醚暴露劑量升高血清睪酮含量降低，各組小鼠血清中睪酮濃度（ng/ml）為：NS:0.966±0.052，DMSO:0.705±0.108，100mg/kg BW:0.309±0.048，200mg/kg BW:0.173±0.086，300mg/kg BW:0.154±0.082，500mg/kg BW:0.103±0.039。與對照組相比，十溴聯(lián)苯醚暴露組P小于0.05，差異有統(tǒng)計學意義。十溴聯(lián)苯醚暴露引起小鼠睪丸蛋白Bcl-2下表達下降，Bax表達上升，Bax/Bcl-2比值升高，說明小鼠睪丸組織中細胞凋亡水平升高。十溴聯(lián)苯醚暴露引起小鼠睪丸蛋白CX-43表達降低，說明小鼠睪丸組織中血睪屏障縫隙連接被破壞。 結(jié)論十溴聯(lián)苯醚對青春期雄性ICR小鼠具有生殖毒性，能夠引起小鼠睪丸組織中細胞凋亡水平的升高和血睪屏障縫隙連接蛋白的破壞，并存在劑量效應(yīng)關(guān)系；cAMP信號通路可能通過影響睪酮的合成與分泌在BDE-209的生殖毒性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
[Abstract]:Objective to explore the reproductive toxicity of ten PBDEs on pubertal male ICR mice; to investigate the signaling pathway of cAMP exposed adolescent male ICR mice reproductive function injury in ten PBDEs; provide the basis for establishing the mechanism of in vitro study on reproductive toxicity of ten polybrominated diphenyl ethers.
Methods 4 week old male ICR 48 mice, adaptive feeding for 3 days were randomly divided into 6 groups. The mice free eating, drinking, feeding environment 20-25 degrees Celsius temperature, humidity of 50% + 10%, 12h day /12h night. The next day at the 1 time, after 7 weeks after the end of the exposure, animals were sacrificed by cervical dislocation. The ice bath under the separation of organs, weighing, stored in the -80 C refrigerator. Weighing mice body weight, testis weight, epididymis weight, sperm count; testis tissue by HE staining; the content of cAMP in serum were measured by ELISA; the testosterone level in serum was determined by radioimmunoassay; mouse testis Western Blot detection of Bax, Bcl-2 and the expression of CX-43 protein.
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本文編號：1722419