本文選題：慶大霉素　切入點：前庭毛細(xì)胞　出處：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一部分慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh激活的鈣依賴性鉀電流的作用 目的：乙酰膽堿(ACh)已被大家公認(rèn)為哺乳動物前庭傳出神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。前期研究發(fā)現(xiàn),ACh可激活豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上大電導(dǎo)鈣依賴性鉀通道(BK)和小電導(dǎo)鈣依賴性鉀通道(SK),分別由m2型膽堿能受體和α9N型膽堿能受體介導(dǎo)。有研究發(fā)現(xiàn)慶大霉素可競爭性抑制膽堿能受體介導(dǎo)的細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流,進(jìn)而阻斷耳蝸毛細(xì)胞上ACh-敏感性鉀電流,但慶大霉素對前庭毛細(xì)胞上的膽堿能受體介導(dǎo)的電流是否有作用尚不清楚。 方法：選擇健康成年雜色豚鼠,麻醉后快速斷頭取出前庭外周終器(橢圓囊斑、球囊斑、壺腹嵴),采用酶加機(jī)械法分離出前庭毛細(xì)胞,培養(yǎng)皿底部預(yù)先均勻涂布鼠尾膠原,待細(xì)胞貼壁后在倒置顯微鏡下選取狀態(tài)良好的Ⅱ型前庭毛細(xì)胞行全細(xì)胞膜片鉗研究。 結(jié)果：1)在膠原酶IA消化的Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上記錄到m2型膽堿能受體介導(dǎo)的BK電流,能被m2型膽堿能受體拮抗劑美索曲明(methoctramine)抑制。且慶大霉素對其有可逆性抑制作用,抑制作用有明顯濃度依賴性,但改變鉗制電壓對抑制強(qiáng)度無明顯影響:2)在胰酶消化的II型前庭毛細(xì)胞上記錄到α9型膽堿能受體介導(dǎo)的SK電流,能被a9型膽堿能受體拮抗劑士的寧(strychnine)抑制。且慶大霉素對其有可逆性抑制作用,抑制作用有濃度依賴性。 結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)慶大霉素對豚鼠II型前庭毛細(xì)胞上乙酰膽堿激活的BK電流和SK電流均有可逆性抑制作用,并有濃度依賴性,對BK電流的抑制作用無電壓依賴性。 第二部分慶大霉素對豚鼠型前庭毛細(xì)胞上ACh激活的大電導(dǎo)鈣依賴性鉀電流的抑制作用Ⅱ機(jī)制 目的：新近研究發(fā)現(xiàn)慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性BK電流有抑制作用,但其機(jī)制尚不清楚,故本實驗進(jìn)一步探討其機(jī)制。 方法：選擇健康成年雜色豚鼠,麻醉后快速斷頭取出前庭外周終器(橢圓囊斑、球囊斑、壺腹嵴),采用酶加機(jī)械法分離出前庭毛細(xì)胞,培養(yǎng)皿底部預(yù)先用鼠尾膠原均勻涂布,待細(xì)胞貼壁后在倒置顯微鏡下選取活性良好的Ⅱ型前庭毛細(xì)胞行全細(xì)胞膜片鉗研究。 結(jié)果：1)提高ACh濃度,慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性BK電流的抑制作用無明顯改變；2)提高細(xì)胞外液鈣濃度,慶大霉素對VHCsⅡ上ACh-敏感性BK電流的抑制作用減弱;3)在不同鈣濃度的細(xì)胞外液中,慶大霉素對Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性BK電流的抑制作用均不受α9型膽堿能受體拮抗劑士的寧(strychnine)影響；4)慶大霉素對L-型鈣通道特異性激動劑(-)-Bay-K8644激活的鈣電流有明顯抑制作用；5)高濃度慶大霉素僅對VHCsⅡ上BK通道激動劑NS1619激活的BK電流有輕微抑制作用。 結(jié)論：慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性BK電流的抑制作用主要通過與鈣離子競爭細(xì)胞膜上的L-型電壓依賴性鈣通道,使鈣內(nèi)流減少,繼而降低BK電流,而不直接作用于m2mAChR,高濃度慶大霉素對BK通道可能有微弱的直接抑制效應(yīng),但絕不是抑制ACh-敏感性BK電流的主要機(jī)制。 第三部分慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh激活的小電導(dǎo)鈣依賴性鉀電流的抑制作用機(jī)制 目的：新近研究發(fā)現(xiàn)慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性SK電流有抑制作用,但其機(jī)制尚不清楚,故本實驗進(jìn)一步探討其機(jī)制。 方法：選擇健康成年雜色豚鼠,麻醉后快速斷頭取出前庭外周終器(球囊斑、橢圓囊斑、壺腹嵴),采用酶加機(jī)械法分離出前庭毛細(xì)胞,靜置于涂有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿中大約30min,待細(xì)胞貼壁后在倒置顯微鏡下選取活性良好的Ⅱ型前庭毛細(xì)胞行全細(xì)胞膜片鉗研究。 結(jié)果：1)提高ACh濃度,慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性SK電流的抑制作用減弱；2)提高細(xì)胞外液鈣離子濃度,慶大霉素對Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性SK電流的抑制作用減弱。 結(jié)論：慶大霉素對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞上ACh-敏感性SK電流的抑制作用主要通過與ACh和鈣離子競爭a9nAChRs而使SK電流減小。這與慶大霉素抑制ACh-敏感性BK電流主要通過與鈣離子競爭L-型電壓依賴性鈣通道,而不影響ACh與m2mAChRs的結(jié)合有差異。與慶大霉素對豚鼠外毛細(xì)胞上ACh-敏感性外向鉀電流的抑制作用對比可發(fā)現(xiàn),外毛細(xì)胞上ACh-敏感性鉀Ⅰ電流可能為a9nAChRs介導(dǎo)的BK電流和SK電流的混合電流。但此推理仍需進(jìn)一步研究和驗證。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 姚琦;程華茂;郭長凱;周濤;黃翔;孔維佳;;Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtype Expression in Type Vestibular Hair Cells of Guinea Pigs[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2011年05期

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本文編號：1721181