本文選題：內(nèi)生真菌　切入點：次級代謝產(chǎn)物　出處：《蘭州理工大學》2016年碩士論文

【摘要】：內(nèi)生真菌與宿主植物具有互利共生的關系,藥用植物中蘊藏著豐富的內(nèi)生真菌資源。研究表明,藥用植物內(nèi)生真菌能代謝產(chǎn)生諸如抗腫瘤、抗菌等與宿主相同或者相似的多種生物活性物質(zhì),這些活性物質(zhì)可以直接作為藥物的有效成分或者作為新藥研發(fā)的先導化合物。為了從藥用植物內(nèi)生真菌中尋找有生物活性的先導化合物,本文主要選取5種藥用植物作為材料,對其內(nèi)生真菌進行分離純化,研究了內(nèi)生真菌發(fā)酵提取物的抗單胺氧化酶和乙酰膽堿酯酶的生物活性,并對有活性菌株的化學成分進行了初步研究。研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.藥用植物內(nèi)生真菌的分離:利用組織塊法分離5種植物的內(nèi)生真菌,共得到45株內(nèi)生真菌,其中從露蕊烏頭(Aconitum gymnandrum)中分離得到25株,甘青烏頭(Aconitum tanguticum)中得到4株,高烏頭(Aconitum sinomontanum)中得到5株,翠雀(Delphinium grandiflorum)中得到8株,紫堇(Corydalis edulis)中得到3株。2.活性測定:對45株菌進行發(fā)酵,發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取,菌絲體用甲醇提取,共得到90種粗提物。用酶標法對粗提物進行抗單胺氧化酶活性測定,結(jié)果顯示,當初濃度為1mg?mL-1時,抑制率在70%以上的粗提物有16個,其中90%以上的有5個,80%以上的有7個,抑制率最高的是LRWT-39(露蕊烏頭39)的乙酸乙酯提取物,抑制率達到99%;當初濃度為300μg?mL-1時,抑制率在70%以上的有5個,進一步測定IC50值,LRWT-39的值最低,達到38.82μg?mL-1。采用改進的Ellman方法測定了樣品抗乙酰膽堿酯酶的活性,結(jié)果顯示,當初濃度為1mg?mL-1時,粗提物抑制率最高的只能達到25%。3.化學成分的初步探究:對5株次級代謝產(chǎn)物具有單胺氧化酶抑制活性的菌株L RWT-26-1(露蕊烏頭26-1),GWT-7(高烏頭7),LRWT-39,GWT-8(高烏頭8),CQ-17(翠雀17)以及課題組前期從荷葉中發(fā)現(xiàn)的具有抗乙酰膽堿酯酶活性的菌株HY-9(荷葉9),進行了化學成分的初步研究。運用現(xiàn)代色譜技術(硅膠柱色譜,大孔樹脂,薄層色譜,高效液相色譜等)進行化合物的分離純化,借助1H-NMR、13CNMR和已知文獻比對,鑒定了7個化合物,分別是Pseurotin A1(1)、Alternarriol(2)、Ergosterolperoxide(3)、Bisdethiobis(methylthio)gliotoxin(4)、alternariol 4-methyl ether(5)、Brevianamide F(6)和fumitremorgin C(7)。通過酶標法檢測所有化合物的抗單胺氧化酶和乙酰膽堿酯酶活性,結(jié)果顯示化合物3(Ergosterolperoxide)和化合物4(Bisd-ethiobis(methylthio)gliotoxin)有一定程度單胺氧化酶抑制活性,初濃度為300μg?mL-1時,抑制率分別為53.82%和65.60%,IC50值分別為142μg?mL-1和130μg?mL-1;但所有化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制率都較低。4.菌種鑒定:運用分子生物學手段,對菌株LRWT-39,GWT-7,GWT-8,LRWT-26-1和菌株CQ-17的ITS區(qū)序列分析,在Blast上與其同源性較高的ITS rDNA序列進行比對,通過聚類分析,并結(jié)合菌落形態(tài)顏色及菌絲體、分生孢子的觀察,最終GWT-8,LRWT-26-1和LRWT-39鑒定為鏈格孢屬(Alternaria sp.)真菌,GWT-7暫時鑒定為喙枝孢屬(Rhinocladiella sp.)真菌,CQ-17暫時鑒定為鐮孢屬(Fusarium sp.)真菌。
[Abstract]:Endophytic fungi and host plants have a symbiotic relationship, medicinal plants contain rich in endophytic fungi. The results show that energy metabolism such as anti-tumor medicinal plant endophytic fungi, antibacterial and host of the same or similar kinds of bioactive substances, these substances can be used as the effective components of drugs or as the lead compounds in drug development. In order to find lead compounds of medicinal plant endophytic bioactive fungi, this paper selects 5 kinds of medicinal plants as materials, the endophytic fungi were purified, studied the anti monoamine oxidase and acetylcholinesterase activity of endophytic fungi fermentation extract, and the chemical components of the active strains were studied. The research contents and results are as follows: separation of 1. medicinal plant endophytic fungi isolated by the method of tissue of 5 species 鐨勫唴鐢熺湡鑿，

本文編號：1721113