發(fā)布時(shí)間：2018-04-08 08:14

  本文選題：抗體　切入點(diǎn)：定點(diǎn)突變　出處：《藥學(xué)學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶催化谷氨酰胺與賴氨酸及其衍生物形成異肽鍵,可用于抗體與小分子藥物的定點(diǎn)偶聯(lián)。本文在構(gòu)建的抗人CD24嵌合抗體c G7的基礎(chǔ)上,定點(diǎn)突變c G7獲得具有4個(gè)可催化的谷氨酰胺位點(diǎn)的嵌合抗體c G7Q。本研究采用overlap PCR技術(shù)將抗體重鏈CH段第297位天冬酰胺突變成谷氨酰胺,構(gòu)建含突變重鏈的真核表達(dá)載體。將含突變重鏈與輕鏈的載體共轉(zhuǎn)染CHO-s細(xì)胞,篩選穩(wěn)定高產(chǎn)單克隆細(xì)胞株,表達(dá)及鑒定目的蛋白c G7Q,表面等離子共振法與流式細(xì)胞術(shù)分析c G7Q與人CD24分子的結(jié)合能力,乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)鑒定定點(diǎn)突變對(duì)抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)的影響,結(jié)果顯示,經(jīng)改造的c G7Q保持母體單抗的結(jié)構(gòu)和特異性結(jié)合能力及部分ADCC效應(yīng),為后續(xù)制備靶向CD24定點(diǎn)偶聯(lián)藥物奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Glutamine transferase catalyzes the formation of isopeptide bonds between glutamine and lysine and its derivatives.Based on the construction of anti-human CD24 chimeric antibody c G7, the chimeric antibody c G7Q with four catalytic glutamine sites was obtained by site-directed mutagenesis.In this study, overlap PCR technique was used to construct eukaryotic expression vector containing mutated heavy chain by mutating asparagine into glutamine at the 297th position of Ch segment of antibody heavy chain.The vector containing mutated heavy chain and light chain was co-transfected into CHO-s cells, and stable and high-yielding monoclonal cell lines were screened. The target protein c G7Qwas expressed and identified. The binding ability of c G7Q to human CD24 molecule was analyzed by surface plasmon resonance and flow cytometry.The effect of site-directed mutagenesis on the cytotoxicity mediated by antibody dependent cells was identified by lactate dehydrogenase release assay. The results showed that the modified c G7Q maintained the structure, specific binding ability and partial ADCC effect of the mAb.It lays a foundation for the further preparation of targeted CD24 conjugated drugs.
【作者單位】： 中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;浙江省中醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目資助(81473125) 江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(BK20161459) 華海藥業(yè)研究生創(chuàng)新基金(1010040003) 江蘇省研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃(碩士)(KYZZ15_0190) 大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練項(xiàng)目基金(SY15090)
【分類號(hào)】：R945

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本文編號(hào)：1720786