本文選題：肝癌　切入點(diǎn)：AA1　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的隨著社會的發(fā)展,引發(fā)肝病的因素也是錯綜復(fù)雜,其中包括氧化還原的失衡。硫氧還蛋白系統(tǒng)是生物體普遍存在的調(diào)控氧化還原平衡系統(tǒng)之一,由硫氧還蛋白(Thioredoxin,Trx)、硫氧還蛋白還原酶(Thioredoxin reductase,TrxR)和煙酰腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)組成。TrxR主要是通過作用于其底物分子Trx來維持細(xì)胞的氧化還原平衡以及調(diào)控氧化還原所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而影響細(xì)胞的生理過程。Trx系統(tǒng)參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展,在腫瘤中的研究眾多。近年研究證實(shí),TrxR在多種原發(fā)性腫瘤中高表達(dá),TrxR的高表達(dá)以及高活性與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。目前觀點(diǎn)認(rèn)為,TrxR在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡以及誘導(dǎo)耐藥性等事件中有著推動作用,此過程往往伴隨著MAPK、NF-κB等信號通路以及腫瘤免疫微環(huán)境的變化。因此,以TrxR為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物引起了研究者的熱切關(guān)注,并有望發(fā)展為治療腫瘤的新靶點(diǎn)。化療藥物聯(lián)用將是今后腫瘤治療的一大趨勢,而Trx抑制劑勢必會扮演重要的角色。目前臨床上,某些TrxR抑制劑對不同腫瘤細(xì)胞的敏感性不同,這可能與患者體內(nèi)的TrxR水平有關(guān)。然而,如何提高藥物對腫瘤細(xì)胞TrxR的選擇性和特異性,減少副作用及克服耐藥性等均是非常值得關(guān)注的問題。所以闡明肝癌發(fā)生的分子機(jī)制,揭示肝癌發(fā)生過程中TrxR涉及的信號網(wǎng)絡(luò),尋找、明確新的診療方法仍然任重道遠(yuǎn)�；谏鲜霈F(xiàn)象,我們通過在體外體內(nèi)展開了以下兩方面的研究:一方面研究了 AA1作為TrxR抑制劑對肝癌進(jìn)程的直接影響,包括增殖、凋亡、線粒體膜電位的影響以及相關(guān)的相關(guān)信號通路,發(fā)現(xiàn)了 AA1可以抑制肝癌的增殖、促進(jìn)其凋亡及抑制自噬等現(xiàn)象,為臨床TrxR抑制劑的使用提供了更為細(xì)致的理論依據(jù)。另一方面,AA1可以通過影響腫瘤免疫微環(huán)境而影響腫瘤發(fā)展進(jìn)程,首次闡明TrxR抑制劑在免疫學(xué)方面的生物學(xué)意義,為臨床用藥及TrxR的進(jìn)一步研究提供了一定的指導(dǎo)。研究方法1.采用DNTB法檢測不同腫瘤細(xì)胞系基礎(chǔ)TrxR的活性情況。2.采用MTT法檢測AA1、化合物24對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響。3.采用PI單染、Annexin-V/PI雙染法分別檢測AA1、化合物24對人和鼠肝癌細(xì)胞系周期、凋亡的影響。4.免疫熒光探針檢測人和鼠肝癌細(xì)胞系ROS產(chǎn)生情況、線粒體受膜電位及自噬小體形成的情況。5.采用western blot實(shí)驗(yàn)檢測AA1作用后MAPK信號通路p-ERK、p-JNK、p-p38的蛋白水平變化;自噬相關(guān)信號通路p-mTOR、p62的蛋白水平變化。6.裸鼠皮下荷瘤HepG2細(xì)胞,檢測AA1體內(nèi)抗HCC效果。7.Transwell體外檢測AA1對脾淋巴細(xì)胞的募集情況。8.C57小鼠荷Hepa1-6細(xì)胞檢測AA1的抗腫瘤效果。9.流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠肝、脾及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞的分群、活化情況。研究結(jié)果1.TrxR在HCC細(xì)胞系中呈現(xiàn)高表達(dá);2.AA1能顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖;3.AA1通過誘導(dǎo)凋亡作用抑制肝癌細(xì)胞增殖;4.AA1通過靶向TrxR由ROS介導(dǎo)凋亡作用;5.AA1誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞線粒體膜電位下降;6.AA1使肝癌細(xì)胞自噬能力降低,但并不依賴于ROS;7.AA1促進(jìn)腫瘤免疫微環(huán)境中CD8+T的募集;8.AA1能夠改善體內(nèi)腫瘤免疫微環(huán)境而抑制腫瘤進(jìn)程;9.化合物24可以抑制HCC增殖;10.化合物24通過誘導(dǎo)凋亡抑制HCC增殖。結(jié)論及意義1.本研究明確了 AA1通過誘導(dǎo)凋亡對HCC的生長產(chǎn)生抑制,并且這種作用由ROS所介導(dǎo)。2.進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),AA1會誘導(dǎo)HCC線粒體膜電位下降;當(dāng)使用了 NAC后,損傷得到緩解,提示為ROS所介導(dǎo);自噬作用受到抑制,但并非ROS介導(dǎo),可能為直接作用,還需要進(jìn)一步探究。3.初次提出TrxR抑制劑與免疫系統(tǒng)之間的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)TrxR抑制劑可以改變腫瘤免疫微環(huán)境中免疫細(xì)胞的組成,影響腫瘤發(fā)展進(jìn)程。4.以上研究或許可以為臨床腫瘤用藥及進(jìn)一步的TrxR抑制劑的研究提供新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

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