本文選題：抗腫瘤藥物　切入點：流式細胞術(shù)　出處：《南京大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：從自然界或人工合成的分子庫中篩選細胞凋亡抗腫瘤候選藥物迄今仍然一個步驟繁雜的實驗,而且實驗對設(shè)備儀器要求較高。本論文研究將流式細胞儀的熒光信號檢測功能和蛋白酶類熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET)相結(jié)合、設(shè)計了較方便用以細胞凋亡抗腫瘤藥物高通量篩選的FRET熒光探針。其主要原理是：通過測定熒光蛋白之間的FRET現(xiàn)象來檢測在藥物作用下、腫瘤細胞內(nèi)中分別位于兩種細胞凋亡途徑中的關(guān)鍵酶casp-8和casp-2的活性,以期用以確定所篩選的化合物是否能夠通過激活這兩種酶而引發(fā)腫瘤細胞的凋亡。將基于熒光顯微鏡技術(shù)的FRET方法與成熟的流式細胞術(shù)相結(jié)合,能夠?qū)崿F(xiàn)本論文中篩選技術(shù)的快速、準確和高通量應(yīng)用。本論文研究利用我們所搭建的流式細胞分析系統(tǒng)和作用機制的已知細胞凋亡誘導(dǎo)藥物,對本文設(shè)計的三色FRET探針EBFP2-C8-EGFP-C2-TagRFP進行了測定和驗證,實驗結(jié)果證明了本文設(shè)計和構(gòu)建的探針能夠分別、獨立地檢測細胞內(nèi)casp-8、casp-2的活性,同時將casp-8、 casp-2的活性表現(xiàn)為FRET效率的變化。論文通過caspase抑制劑,對所設(shè)計檢測探針酶活性測定的有效性以及其與FRET效率的關(guān)聯(lián)性進行了驗證。本論文工作為新的基于流式細胞儀分析平臺、用于細胞凋亡抗腫瘤藥物篩選的FRET熒光探針奠定了理論與實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:The screening of apoptotic antitumor drugs from nature or synthetic molecular banks is still a complicated experiment. In this paper, the fluorescence signal detection function of flow cytometry is combined with the fluorescence resonance energy transfer technique of protease. A FRET fluorescence probe was designed for high throughput screening of apoptosis antitumor drugs. The main principle of this probe was to detect the FRET phenomenon between fluorescent proteins. The activities of casp-8 and casp-2, which are the key enzymes in two kinds of apoptosis pathway in tumor cells, respectively. In order to determine whether the selected compounds can trigger apoptosis of tumor cells by activating the two enzymes, the FRET method based on fluorescence microscopy is combined with mature flow cytometry. In this paper, we study the known apoptosis-inducing drugs based on the flow cytometry analysis system and the mechanism of cell apoptosis, which can be used in this paper to realize the rapid, accurate and high-throughput application of the screening techniques. The EBFP2-C8-EGFP-C2-TagRFP of the three-color FRET probe designed in this paper was measured and verified. The experimental results show that the designed and constructed probes can independently detect the activity of casp-8 casp-2 in cells. At the same time, the activity of casp-8, casp-2 showed the change of FRET efficiency. The validity of the enzyme activity of the probe and its correlation with the efficiency of FRET were verified. The work of this paper is based on a new flow cytometry (FCM) analysis platform. The FRET fluorescent probe used for screening anti-tumor drugs laid a theoretical and experimental foundation.
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R91

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