本文選題：小鼠　切入點(diǎn)：腦缺血/再灌注模型　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分：線栓法制備不同體重昆明種小鼠局灶性腦缺血/再灌注模型的建立及評(píng)價(jià) 目的： 缺血性腦卒中的預(yù)防及有效治療是臨床上面臨的在國(guó)際醫(yī)學(xué)上的一項(xiàng)重要課題。制備一種理想的大腦中動(dòng)脈栓塞(modified neuro-ogiealseverityseores, MCAO）動(dòng)物模型是研究該類疾病的重要手段。本文利用線栓法復(fù)制小鼠腦缺血/再灌注（MCAO）損傷模型，探討與小鼠MCAO模型穩(wěn)定性相關(guān)的潛在因素，為建立成模率高、死亡率低的小鼠MCAO模型提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 昆明種（KM）小鼠100只，體重20-39g，雌雄均入選，分別將小鼠按照體重以及性別分為假手術(shù)組（n=20）和不同體重實(shí)驗(yàn)組(n=80)。模型組依照體重大小分組：A組（♂，20-24g）、B組（♂，25-29g）、C組（♂，30-34g）、D組（♂，35-39g），E組（♀，20-24g）、F組（♀，25-29g）、G組（♀，30-34g）、H組（♀，35-39g）。線栓法制備局灶性腦缺血/再灌注模型，缺血再灌注24h后評(píng)估模型，對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能損傷評(píng)分以及腦梗死體積的測(cè)定。 結(jié)果： 1.成功率死亡率的檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雄性（♂）KM小鼠的手術(shù)耐受能力高于雌性（♀）昆明種小鼠。其中，A組、B組的成功率高達(dá)70%、80%，且B組的死亡率較低。 2.神經(jīng)功能評(píng)分的測(cè)定：同假手術(shù)組相比，各實(shí)驗(yàn)組小鼠腦缺血再灌注后，出現(xiàn)神經(jīng)異常，與雌性（♀）KM小鼠相比，雄性（♂）KM小鼠的行為學(xué)評(píng)分較高。A、B兩組小鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分均比C、D組高（P＜0.01）；E、F組小鼠的行為 學(xué)評(píng)分同G、H組相比較有顯著性增加（P＜0.01）。另外，A組的行為學(xué)評(píng)分高于E組（P＜0.01）；B組的行為學(xué)評(píng)分與F組相比明顯提高（P＜0.01）。 3.梗死面積的測(cè)定：模型組小鼠腦切片有明顯的白色梗死區(qū)。A、B兩組小鼠的梗死灶面積較C、D組有顯著性提高（P＜0.01）；E、F兩組小鼠腦梗死灶的面積顯著高于G、H組（P＜0.05）。另外，B組的腦梗塞面積與F組相比明顯提高（P＜0.01）。 結(jié)論 線栓法是一種簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、可靠的制備小鼠局灶性腦缺血/再灌注模型的方法。影響線栓法構(gòu)建模型成功率的因素有許多，其中小鼠體重與線栓直徑比例的匹配、品系性別的選擇、手術(shù)時(shí)間、進(jìn)線深度以及25-28℃左右的室溫是手術(shù)過(guò)程中需注意的重要因素。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體重在25g左右的雄性KM小鼠制備MCAO模型成功率較高，適合建立小鼠局灶性腦缺血/再灌注（MCAO）模型。 第二部分：鈣敏感受體在小鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制 目的： 臨床上缺血性腦卒中的死亡率很高，其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，目前尚未明了，因此需要進(jìn)一步闡明缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制，尋找新的有效靶點(diǎn)。本文探討了鈣敏感受體（CaSR）的活化對(duì)于腦缺血再灌注損傷中神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡及其相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響。 方法： 線栓法構(gòu)建小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型，觀察CaSR在腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)使用CaSR激動(dòng)劑三氯化釓(Gdcl3)以及CaSR抑制劑NPS2390進(jìn)行了干預(yù)研究。23-25g的雄性KM小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham）、模型組（I/R）、激動(dòng)劑組（I/R+Gdcl3）、阻斷劑組（I/R+NPS2390），每組16只。腦缺血2h再灌注22h后，對(duì)小鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估，TTC染色檢測(cè)腦梗死體積，HE染色觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化，Western Blot檢測(cè)腦組織CaSR、Bax、Bcl-2、p-JNK/JNK和p-P38/P38表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.神經(jīng)功能評(píng)分及腦梗死體積的測(cè)定：與假手術(shù)組相比，模型組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分較高，TTC染色顯示小鼠腦組織切片呈明顯的蒼白色梗死灶。與模型組相比，激動(dòng)劑組小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分進(jìn)一步增加，其腦梗死灶面積顯著增大；而CaSR抑制劑組可降低小鼠神經(jīng)功能評(píng)分，減少腦梗死面積。 2.CaSR表達(dá)水平：模型組小鼠腦皮層與海馬CaSR蛋白表達(dá)水平顯著高于假手術(shù)組。與模型組相比，激動(dòng)劑組小鼠腦皮層與海馬CaSR蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，而抑制劑組可顯著抑制CaSR蛋白表達(dá)上調(diào)。 3.HE染色病理結(jié)果：假手術(shù)組小鼠腦組織結(jié)構(gòu)完整，模型組小鼠神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，體積縮小，胞體皺縮，部分細(xì)胞壞死，而激動(dòng)劑組小鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞損傷更加顯著；抑制劑組小鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞損傷有所減輕。海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷較皮層區(qū)嚴(yán)重。 4.腦組織Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)： 與假手術(shù)組相比，模型組小鼠腦組織皮層和海馬區(qū)Bax表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)減少；與模型組比較，激動(dòng)劑GdCl3可進(jìn)一步上調(diào)腦組織Bax蛋白表達(dá)，抑制Bcl-2蛋白表達(dá)；而抑制劑NPS2390可抑制腦組織Bax的表達(dá)，上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)。 5.腦組織中p-JNK/JNK、p-P38/P38蛋白的表達(dá)：假手術(shù)組小鼠腦皮層海馬區(qū)有少量磷酸化JNK及磷酸化P38的表達(dá)；模型組小鼠腦組織p-JNK、p-P38的表達(dá)水平上調(diào)，CaSR激動(dòng)劑Gdcl3可顯著上調(diào)小鼠皮層海馬區(qū)p-JNK、p-P38的表達(dá)水平，而CaSR抑制劑NPS2390可抑制小鼠皮層海馬區(qū)p-JNK、p-P38的表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論 CaSR的激活和高表達(dá)參與介導(dǎo)了缺血性腦卒中的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，使神經(jīng)元過(guò)度興奮，從而激活下游JNK/P38MAPK通路，，上調(diào)Bax，下調(diào)Bcl-2，促進(jìn)缺血神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:First part: establishment and evaluation of focal cerebral ischemia / reperfusion model in Kunming mice with different weight by wire bolt method
Objective:
The prevention of ischemic stroke and the effective treatment is an important topic in the international medical clinic face. Prepare a kind of ideal brain artery embolism (modified neuro-ogiealseverityseores MCAO) animal model is an important means to study the disease. By using the suture method in mice cerebral ischemia / reperfusion (MCAO) injury model to investigate the potential factors associated with the stability of the MCAO model mice, in order to establish a high successful rate to provide experimental basis for MCAO mouse model of low mortality.
Method錛

本文編號(hào)：1636303