本文選題：重組人促紅素　切入點：理化對照品　出處：《藥物分析雜志》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:建立重組人促紅細胞生成素的理化對照品的質(zhì)量標準,對8家企業(yè)的促紅素理化對照品進行質(zhì)量評價。方法:用正常小鼠網(wǎng)織紅細胞計數(shù)法測定體內(nèi)生物學活性,使用LC-MS繪制質(zhì)量肽圖譜。色譜條件:采用BEH300 C4色譜柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流動相為水(A)-乙腈(B)-1%甲酸水溶液(C),梯度洗脫(0~60 min,1%B→60%B,10%C;60~61 min,60%B→90%B,10%C;61~75 min,90%B→1%B,10%C),流速0.2 m L·min~(-1),柱溫為40℃,樣品保存溫度為10℃,上樣量5μL;質(zhì)譜條件:MSE模式采集數(shù)據(jù),毛細管電壓3 000 V,Cone電壓40 V,去溶劑氣體溫度350℃,源溫120℃,去溶劑氣體流速800 L·h-1,掃描范圍m/z 50~2 000。確證一級結(jié)構(gòu),二硫鍵鏈接方式及糖基化位點;繪制N糖圖譜,分析寡糖結(jié)構(gòu);用毛細管區(qū)帶電泳分析異構(gòu)體。采用壓力進樣3.45 k Pa;進樣時間10 s,分離電壓15.4 k V,分離時間80 min,檢測波長214 nm。其余檢測項目按中國藥典2015年版三部方法進行。結(jié)果:建立的方法適合促紅素理化對照品的檢測,各樣品的氨基酸序列均與理論一致;二硫鍵連接方式均為Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位點均為Ser126,N-糖基化位點均為Asn24、Asn38、Asn83;各樣品的糖基修飾方式存在差異,不同糖型的相對比例不一致。等電聚焦結(jié)果為5~8條電荷異構(gòu)體條帶,不同樣品的電荷異構(gòu)體的組成比例有所差異,蛋白質(zhì)含量、體內(nèi)比活性、電泳純度、液相純度、等電聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽圖結(jié)果均符合擬定的理化對照品質(zhì)量標準。結(jié)論:建立了理化對照品的質(zhì)量標準,不同企業(yè)的理化對照品質(zhì)量總體穩(wěn)定一致,但糖基化水平存在一定差異,分析比較了不同企業(yè)的促紅素理化對照品在生物比活性,糖基化,異構(gòu)體分布、電荷異質(zhì)性等方面的差異。
[Abstract]:Objective: to establish the quality standard of physicochemical reference substance of recombinant human erythropoietin and evaluate the quality of physicochemical reference substance of erythropoietin in 8 enterprises. Methods: the biological activity in vivo was determined by reticulocyte counting method in normal mice. Mapping of quality peptides using LC-MS. Chromatographic conditions: BEH300 C4 column: 2.1 mm 脳 50 mm ~ 3.5 渭 m ~ (-1) 渭 m ~ (-1) C ~ (-1) C _ (1) C _ (1) C _ (C), gradient elution: 0 ~ 60 min ~ (-1) C ~ (2 +) C _ (1) C _ (1) C _ (1) C _ (2) C _ 4 C _ 4 column. 鈫，

本文編號：1633722