本文選題：鹽酸奧布卡因　切入點(diǎn)：氧氟沙星　出處：《中國(guó)海洋大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：隨著醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展，目前臨床上可供選擇的眼科用藥越來(lái)越多，隨著角膜感染的抗菌藥物、抗病毒藥物以及用于手術(shù)中的麻醉劑藥物等的廣泛應(yīng)用，為臨床治療提供了多種選擇機(jī)會(huì)，而眼科藥物的毒性作用已引起臨床用藥者的高度重視并成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究課題。大部分的眼科藥物是通過(guò)眼表給藥的，極有可能首先會(huì)對(duì)角膜產(chǎn)生毒副作用，更甚者，可能會(huì)致盲。而角膜上皮作為角膜最外層，是防御外界致病因子侵犯的物理屏障，其結(jié)構(gòu)的完整性決定了角膜執(zhí)行正常的生理功能。因此，研究藥物對(duì)于人角膜上皮細(xì)胞（HCEP）的影響對(duì)于制定安全的臨床給藥方案，建立科學(xué)的新藥研究模式以及篩選高效、低毒的眼科藥物具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。到目前為止，尚未見(jiàn)常用表面麻醉劑鹽酸奧布卡因與喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對(duì)人角膜上皮細(xì)胞的毒副作用報(bào)道，本文以實(shí)驗(yàn)室自建的非轉(zhuǎn)染、無(wú)致瘤性的HCEP細(xì)胞系為研究體系，研究了鹽酸奧布卡因與氧氟沙星對(duì)HCEP細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。 本文分別將臨床濃度為4g/L的鹽酸奧布卡因倍比稀釋至0.125g/L，臨床濃度為3g/L的氧氟沙星倍比稀釋至0.1875g/L，對(duì)體外培養(yǎng)的HCEP細(xì)胞加藥處理，通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的狀態(tài)、MTT檢測(cè)細(xì)胞的活性，結(jié)果表明，鹽酸奧布卡因和氧氟沙星分別在0.5~4g/L和1.5~3g/L的濃度范圍內(nèi)能夠引起HCEP細(xì)胞的毒副作用，通過(guò)流式細(xì)胞儀研究其細(xì)胞周期變化，結(jié)果顯示1g/L鹽酸奧布卡因與3g/L氧氟沙星均使HCEP細(xì)胞周期發(fā)生了S期阻滯，為進(jìn)一步研究這兩種藥物的毒副作用機(jī)理，通過(guò)AO/EB熒光雙染色法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率、Annexin V/PI觀察細(xì)胞凋亡情況、凝膠電泳檢測(cè)DNA斷片化、以及透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，這兩種藥物在上述濃度下均確能引起細(xì)胞凋亡，電泳結(jié)果中呈現(xiàn)出典型的梯狀條帶，在電鏡中能清楚地觀察到細(xì)胞空泡化、染色質(zhì)固縮和凋亡小體等凋亡細(xì)胞的理化特征。本文還進(jìn)一步探討了這兩種藥物凋亡誘導(dǎo)途徑，通過(guò)觀察加藥后HCEP細(xì)胞線粒體膜電位變化，以及半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶caspase-2，-3，-9的變化情況，，結(jié)果顯示，此兩種藥物處理后的HCEP細(xì)胞線粒體膜電位均發(fā)生了下降，線粒體均產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)，而起始者caspase-2，-9在一定時(shí)間內(nèi)濃度增加到最大值并最終激活了執(zhí)行者caspase-3，進(jìn)一步引起了細(xì)胞凋亡。從而，推測(cè)出這兩種藥物極有可能通過(guò)線粒體途徑誘發(fā)了凋亡作用。 本文以自主建立的非轉(zhuǎn)染、無(wú)致瘤性的HCEP細(xì)胞系為研究體系，進(jìn)行了眼表麻醉劑鹽酸奧布卡因和喹諾酮類抗菌藥氧氟沙星對(duì)HCEP細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用的研究，證明了這兩種藥物分別在0.5~4g/L和1.5~3g/L的濃度范圍內(nèi)能引起HCEP細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，具有濃度和時(shí)間依賴性，并且極有可能是通過(guò)線粒體途徑而誘導(dǎo)凋亡。同時(shí)驗(yàn)證了體外培養(yǎng)的HCEP細(xì)胞可以作為評(píng)價(jià)眼科藥物毒性的有效工具，為眼科藥物的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，也為新型眼科藥物的開(kāi)發(fā)提供理想的體外研究模型。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1629299