本文選題：白假絲酵母菌　切入點：生物被膜　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：白假絲酵母菌(Candida albicans)是一種常見的人類致病真菌,據(jù)疾病控制中心(CDC)統(tǒng)計結(jié)果顯示,在口腔假絲酵母菌病發(fā)病率中,兒童的發(fā)病率為7%,艾滋病病人為31%,癌癥化療患者為20%;在健康女性中,假絲酵母菌陰道炎也十分常見,臨床表現(xiàn)多呈反復發(fā)作。由于白假絲酵母菌可以通過形成生物被膜以應對多種復雜的環(huán)境,傳統(tǒng)的抗真菌藥物難以穿透從而導致白假絲酵母菌難以清除。白假絲酵母菌生物被膜的形成包括四個階段:粘附期,定植初期,細胞外基質(zhì)物質(zhì)分泌期,成熟期。生物被膜是白假絲酵母菌重要的毒力因子之一,菌可借此粘附在宿主組織,假體,植入物(如導管,心臟瓣膜等)的表面,以利于白假絲酵母菌的定植。并且,生物被膜還能夠顯著增加白假絲酵母菌對傳統(tǒng)抗真菌藥物的耐藥性,與浮游細胞相比,生物被膜形態(tài)的白假絲酵母菌對唑類藥物的耐藥性升高約1000倍。因此,亟待尋找新的抗真菌藥物來應對白假絲酵母菌感染。舒洛地爾(1-(4-異丙基苯硫基)-2-氨基-辛基丙醇)是一種鈣通道阻滯劑,能夠抗血管痙攣、抗血栓形成。有研究發(fā)現(xiàn),舒洛地爾在體外能夠抑制白假絲酵母菌的生長;還有研究證實,舒洛地爾聯(lián)合氟康唑用藥,對新型隱球菌有抑制作用,而舒洛地爾對白假絲酵母菌生物被膜的作用,目前未見相關研究報道。本研究通過檢測舒洛地爾對白假絲酵母菌生物被膜形成及成熟生物被膜的抑制作用來評估其對生物被膜相關的白假絲酵母菌病的治療潛能。目的研究舒洛地爾對白假絲酵母菌生物被膜的抑制作用。通過體外實驗評價舒洛地爾抑制生物被膜的效果及初步探究其抑制白假絲酵母菌生物被膜的作用機制;通過體內(nèi)實驗評價舒洛地爾對白假絲酵母菌陰道炎的治療效果,以期為淺表性白假絲酵母菌生物被膜感染的治療提供新策略。方法1.運用XTT減低法測定舒洛地爾對白假絲酵母菌YEM30,臨床分離株LC3浮游細胞最小抑菌濃度(MIC_(80)),生物被膜抑制濃度(BIC_(80)),生物被膜根除濃度(BEC_(80))。2.通過時間殺菌曲線檢測舒洛地爾抑制白假絲酵母菌生物被膜形成、成熟期生物被膜的動力學。3.運用掃描電子顯微鏡觀察舒洛地爾對白假絲酵母菌生物被膜的形態(tài)影響。4.運用透射電子顯微鏡觀察舒洛地爾對白假絲酵母菌生物被膜細胞超微結(jié)構(gòu)的影響。5.運用倒置顯微鏡觀察舒洛地爾在不同加藥時間對白假絲酵母菌生物被膜酵母相-菌絲相形態(tài)轉(zhuǎn)變影響。6.運用qRT-PCR技術檢測舒洛地爾對白假絲酵母菌菌絲生長特異性相關基因的表達影響。7.構(gòu)建白假絲酵母菌陰道炎模型,評價舒洛地爾在體內(nèi)抗白假絲酵母菌生物被膜效果。結(jié)果1.舒洛地爾可抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成,并可破壞成熟的生物被膜。舒洛地爾對白假絲酵母菌YEM30,臨床分離株LC3 MIC_(80)為4 μg/mL,BIC_(80)為16 μg/mL,BEC_(80) 為 64 μg/mL。2.舒洛地爾抑制白假絲酵母菌生物被膜細胞的代謝活性呈濃度依賴性,隨著作用時間延長,濃度越高,抑制效果越好。3.舒洛地爾在體外使白假絲酵母菌生物被膜細胞皺縮,隨著作用時間延長,出芽細胞脫落,皺縮明顯。4.舒洛地爾在體外能夠破壞白假絲酵母菌生物被膜細胞的超微結(jié)構(gòu),使細胞膜皺縮,細胞壁斷裂,細胞內(nèi)電子密度降低,細胞內(nèi)容物滲出。5.舒洛地爾有效阻止白假絲酵母菌從酵母相向菌絲相轉(zhuǎn)變,舒洛地爾作用時間點越早,作用越明顯。6.舒洛地爾在體外使白假絲酵母菌菌絲生長特異性相關基因HWP1,ALS3,ECE1的表達下調(diào)。7.動物實驗顯示,與對照組相比,用藥組的菌落數(shù)顯著減少,炎癥減輕,舒洛地爾能有效治療白假絲酵母菌陰道炎。結(jié)論研究結(jié)果顯示,舒洛地爾在體內(nèi)外均能有效抑制白假絲酵母菌生物被膜。體外實驗表明舒洛地爾不僅能破壞成熟生物被膜的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),而且通過下調(diào)菌絲特異性相關基因HWP1,ALS3,ECE1的表達,阻斷菌絲相表達,從而抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成。白假絲酵母菌陰道炎動物模型的研究表明,用藥組的菌落數(shù)顯著減少,炎癥減輕。綜上所述,我們的研究表明舒洛地爾對于淺表性白假絲酵母菌生物被膜感染具有較理想的抑制作用,是一種潛在的、有價值的治療手段。
[Abstract]:Candida albicans (Candida albicans) is a common human pathogen, according to the Centers for Disease Control (CDC) statistics show that in the oral candidiasis incidence in children, the incidence of 7% AIDS patients, 31% patients with cancer chemotherapy was 20%; in healthy women, Candida yeast vaginitis is also very common, the clinical manifestations were recurrent. Due to Candida albicans can form biofilms in response to a variety of complex environment, the traditional antifungal drugs to penetrate causing Candida albicans is difficult to remove. Candida albicans biofilm formation includes four stages: adhesion. Early colonization, extracellular matrix material secretion period, mature period. The biofilm is one of the important virulence factors of Candida albicans, bacteria can take the adhesion in the host tissue, prosthesis, implants (such as catheters, heart valve and so on) the table The surface, in order to Candida albicans colonization and biofilm also significantly increases the resistance of Candida albicans to traditional antifungal drugs, compared with planktonic cells, drug resistance of Candida albicans by biological membrane morphology of azoles increased about 1000 times. Therefore, it is urgent to find to deal with white Candida infection of new antifungal agents. Suloctidil (1- (4- isopropyl phenylthio) -2- amino - octyl alcohol) is a calcium channel blocker, can anti vasospasm, thrombosis. Studies have found that suloctidil could inhibit Candida albicans in vitro and growth; study confirmed that suloctidil fluconazole treatment has inhibitory effect on Cryptococcus neoformans and suloctidil Candida albicans biofilm, currently no reports about this research. By detecting suloctidil Candida albicans Biological inhibition of membrane formation and mature biofilm to assess its effect on Candida albicans disease the therapeutic potential of biofilm related. Objective to study the inhibitory effect of suloctidil on Candida albicans biofilm. In vitro evaluation of suloctidil biofilm effect and explore its inhibition the mechanism of Candida albicans biofilm; in vivo evaluation of suloctidil Candida albicans vaginitis treatment, superficial provides a new strategy for the treatment of Candida albicans biofilms in order for infection. Methods 1. using XTT reduction method for the determination of suloctidil Candida albicans YEM30. Strain LC3 of planktonic cells minimal inhibitory concentration of clinical isolates (MIC_ (80)), biofilm inhibitory concentration (BIC_ (80)), biofilm eradication concentration (BEC_ (80).2.) by time killing curve detection to suppress white Luodier Shu Candida albicans biofilm formation, mature biofilm kinetics of.3. by scanning electron microscopy observation suloctidil on Candida albicans biofilm morphology by transmission electron microscope to observe the effect of.4. suloctidil on Candida albicans biofilm cell ultra microstructure effects by.5. inverted microscope suloctidil at different dosing time on Candida albicans biofilm - yeast phase of mycelial phase transformation effect of.6. using qRT-PCR technology to detect suloctidil Candida albicans mycelial growth of specific gene expression effect of.7. construction of Candida albicans vaginitis model, evaluate the suloctidil in vivo anti Candida albicans biofilm effect results 1.. Suloctidil can inhibit the formation of Candida albicans biofilms, and can damage the mature biofilm suloctidil with Candida. Albicans clinical isolates of LC3 YEM30, MIC_ (80) 4 g/mL, BIC_ (80) 16 g/mL, BEC_ (80) 64 g/mL.2. suloctidil inhibit Candida albicans biofilm metabolic activity of mesangial cells in a concentration dependent manner, with the extension of the time, the higher the concentration, inhibition the better.3. suloctidil in vitro to Candida albicans biofilm cell shrinkage, with the prolongation of time, budding cells shedding, obvious shrinkage.4. suloctidil can destroy the Candida albicans biofilm ultrastructure of cell membrane in vitro, the cell membrane shrinkage, cell wall fracture, the decrease of intracellular electron density.5., cell exudant suloctidil effectively prevent Candida albicans from yeast to hyphal phase transition, suloctidil time points earlier and more obvious effect of.6. suloctidil in vitro to Candida albicans hyphal growth specific genes related to H WP1, ALS3, ECE1 expression of.7. in animal experiments, compared with the control group, treatment group was significantly reduced the number of colonies, inflammation, suloctidil can be effective in the treatment of Candida vaginitis. Conclusion the results of the study showed that suloctidil could effectively inhibit Candida albicans biofilm in vitro and in vivo. In vitro experiments indicated that suloctidil can not only destroy the mature biofilm morphology and ultrastructure of the membrane, and through down-regulation of hypha specific genes HWP1, ALS3, ECE1 expression, blocking hyphal expression, thereby inhibiting the formation of Candida albicans biofilms. Research on Candida albicans vaginitis animal model showed that colony the number of treatment group was significantly reduced, reduced inflammation. In summary, our study shows that suloctidil for superficial Candida albicans biofilm can inhibit ideal membrane infection, is a kind of potential, Valuable treatment.

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

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