發(fā)布時間：2018-03-08 02:30

  本文選題：銀杏葉提取物　切入點：前體脂質(zhì)體　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract,Gb E)是從銀杏樹的干燥葉中提取純化而成的一種淡黃色粉狀物質(zhì),化學(xué)成分復(fù)雜,黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯是其主要活性成分。臨床上廣泛用于心腦血管疾病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿爾茨海默癥、眩暈和耳鳴的預(yù)防和治療,市場前景廣闊。然而,黃酮醇苷成分水溶性和脂溶性差,口服具有首過效應(yīng)且難以跨過血腦屏障,因此Gb E普通制劑口服生物利用度低,在腦部分布少,臨床療效大大降低。為了提高Gb E的口服生物利用度和在腦組織中的分布,本文制備了一種新型的含膽汁鹽的前體脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)用于口服遞送Gb E,并對其體內(nèi)外特征和腸吸收機理進行了研究。主要研究內(nèi)容如下:一、P-Gb E體外分析方法的建立。本文采用高效液相色譜法建立了Gb E前體脂質(zhì)體(Gb E proliposomes,P-Gb E)中三種黃酮醇苷(槲皮素、山柰素和異鼠李素)和四種萜類內(nèi)酯(白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C)的體外含量測定方法,并進行了方法學(xué)驗證,結(jié)果顯示各項指標(biāo)均符合相關(guān)要求。同時建立了超速離心法測定P-Gb E復(fù)溶后所得Gb E脂質(zhì)體包封率的方法。該方法操作簡單、快速、重現(xiàn)性好,可以有效分離Gb E脂質(zhì)體復(fù)溶液中的游離藥物。二、P-Gb E的制備和處方優(yōu)化。本文采用改良的乙醇注入法結(jié)合噴霧干燥法成功制備了P-Gb E。該制備方法操作簡便,省時省力,成本較低,易于工業(yè)化放大。采用單因素實驗方法分別考察了處方濃度、蛋黃卵磷脂(Egg yolk lecithin,e PC)投料量、脫氧膽酸鈉(Sodium deoxycholate,Na DC)投料量、載體種類和載體投料量對P-Gb E復(fù)溶后所得脂質(zhì)體的粒徑、粒度分布、黃酮醇苷包封率和萜類內(nèi)酯包封率等指標(biāo)的影響,確定了黃酮醇苷包封率是評價P-Gb E的最重要指標(biāo),e PC投料量、Na DC投料量和載體甘露醇投料量是影響黃酮醇苷包封率的三個顯著因素。在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以黃酮醇苷包封率為考察指標(biāo),采用Box-Behnken設(shè)計和響應(yīng)面法對P-Gb E的處方進行優(yōu)化,確定了最優(yōu)處方為Gb E 200 mg、e PC 225mg、Na DC 67mg和甘露醇735mg。三、P-Gb E的質(zhì)量評價。本文對最優(yōu)處方制備的P-Gb E的外觀形態(tài)、粒徑、粒度分布、表面電位、包封率、體外釋放度、體外溶出度、固態(tài)特征、初步穩(wěn)定性和初步安全性進行了評價。P-Gb E為淺黃色粉末,略有一定的腥臭味。場發(fā)射掃描電鏡觀察其形態(tài),大多為球形。P-Gb E復(fù)溶后所得Gb E脂質(zhì)體的粒徑為211.7±5.4 nm,PDI值為0.197±0.012,zeta電位為-27.7±5.5 m V。黃酮醇苷包封率和萜類內(nèi)酯包封率分別為91.48%±0.77%和96.18%±0.55%。體外釋放結(jié)果表明,P-Gb E復(fù)溶所得的脂質(zhì)體具有一定的遲釋或緩釋作用,釋藥具有p H依賴性,釋藥行為符合Korsmeyer-Peppas模型,以Fick擴散為主。體外溶出結(jié)果表明,前體脂質(zhì)體可以明顯增強Gb E在腸道(p H 6.8)中的溶出度。差示掃描量熱法和傅里葉變換紅外光譜法的結(jié)果表明,在前體脂質(zhì)體的制備過程中,Gb E與其他輔料e PC、Na DC和甘露醇不是簡單的物理混合,而是形成了新的物相,并產(chǎn)生了一些較弱的相互作用,如氫鍵、范德華力等。恒溫加速實驗結(jié)果表明,P-Gb E在溫度40℃及相對濕度75%條件下,具有良好的貯存穩(wěn)定性。小鼠急性毒性實驗結(jié)果表明,P-Gb E具有良好的安全性。四、P-Gb E生物樣品分析方法的建立本文建立了一種快速、靈敏和準(zhǔn)確的同時測定生物樣品(大鼠血漿,大鼠肝、腎、脾、心、肺和腦六種組織以及大鼠腸灌流液)中槲皮素、山柰素、異鼠李素、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer,UPLC-MS/MS)方法。以花旗松素為內(nèi)標(biāo),采用液-液萃取法對生物樣品中七種待測成分進行提取,經(jīng)Waters BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色譜分離后注入三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測。質(zhì)譜檢測系統(tǒng)采用電噴霧離子(Electronic spray ion,ESI)源,正離子檢測方式,在多反應(yīng)監(jiān)測(Multiple reaction monitoring,MRM)模式下檢測七種成分和內(nèi)標(biāo)。根據(jù)FDA和SFDA的相關(guān)規(guī)定,對大鼠血漿,大鼠肝、腎、脾、心、肺和腦六種組織以及大鼠腸灌流液的分析方法進行完整的方法學(xué)驗證,對專屬性、線性、最低定量限(Lower limit of quantification,LLOQ)、精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率以及穩(wěn)定性進行了考察,結(jié)果顯示各項指標(biāo)均符合相關(guān)要求。五、P-Gb E的藥代動力學(xué)研究。通過建立的同時測定大鼠血漿中槲皮素、山柰素、異鼠李素、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的UPLC-MS/MS方法,對P-Gb E的大鼠藥代動力學(xué)特征進行了研究。與Gb E相比,除白果內(nèi)酯外,P-Gb E中其他六種成分的Cmax、Tmax、T1/2、AUC0 ∞和MRT0 ∞均顯著增大(P0.05),P-Gb E中槲皮素、山柰素、異鼠李素、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的相對生物利用度(P-Gb E的AUC0 ∞與Gb E的比值)分別為2.45、2.11、2.64、2.03、3.33和2.94,表明前體脂質(zhì)體具有降低Gb E在胃腸道的吸收速率、延長其血液循環(huán)時間,提高其口服生物利用度的作用。六、P-Gb E的組織分布研究。通過建立的同時測定大鼠肝、腎、脾、心、肺和腦六種組織中槲皮素、山柰素、異鼠李素、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的UPLC-MS/MS方法,對P-Gb E的大鼠體內(nèi)組織分布特征進行了研究。除腎以外,P-Gb E中七種成分大多數(shù)分布于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)豐富的肝、脾和肺組織中。與Gb E相比,P-Gb E中七種成分在肝、脾、心、肺和腦中的藥時曲線下面積(AUC)顯著增大(P0.05),在腎中的AUC顯著減小(P0.001),表明前體脂質(zhì)體顯著提高了Gb E在肝、脾、心、肺和腦組織中的分布。P-Gb E中三種黃酮醇苷成分的相對攝取率(P-Gb E的AUC與Gb E的比值)從大到小依次是腦、肺、脾、心、肝和腎,四種萜類內(nèi)酯成分的相對攝取率從大到小依次是腦、肺、心、脾、肝和腎,顯示前體脂質(zhì)體具有一定的腦、肺組織靶向性,表明前體脂質(zhì)體具有跨血腦屏障的能力。七、P-Gb E腸吸收機理的研究。通過建立的同時測定大鼠腸灌流液中槲皮素、山柰素、異鼠李素、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的UPLC-MS/MS方法,采用大鼠在體單向腸灌流模型對P-Gb E的腸吸收機理進行了研究。在十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸四個腸段中,除白果內(nèi)酯外,P-Gb E中其他六種成分的吸收速率常數(shù)(Absorption rate constant,Ka)和表觀滲透系數(shù)(Apparent permeability coefficient,Papp)均顯著大于Gb E(P0.05),P-Gb E中槲皮素等七種成分的Ka值大小順序是十二指腸回腸空腸結(jié)腸,表明前體脂質(zhì)體可以顯著提高Gb E在腸道的吸收,主要吸收部位為十二指腸和回腸。綜上所述,將Gb E制備成前體脂質(zhì)體后,其口服生物利用度、體內(nèi)靶向性和跨血腦屏障能力均得到了顯著改善。因此,作為一種新型口服給藥系統(tǒng),含膽汁鹽的前體脂質(zhì)體劑型是提高難溶性藥物口服生物利用度和跨血腦屏障能力的有效方法,同時本研究也為臨床應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943
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本文編號：1582037