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核糖核酸干擾基質(zhì)金屬蛋白酶-3基因?qū)Υ笫笱芷交〖毎鲋车挠绊?/H1>
發(fā)布時間:2018-03-08 01:31

  本文選題:基質(zhì)金屬蛋白酶- 切入點:血管平滑肌細胞 出處:《中國循環(huán)雜志》2015年02期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的:研究靶向大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3基因的小干擾核糖核酸(si RNA)對血管平滑肌細胞增殖的影響。方法:構(gòu)建靶向自發(fā)性高血壓大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)的三對核糖核酸(RNA)干擾序列。將體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞隨機分為對照組、Lipofectamine 2000(轉(zhuǎn)染試劑)組、MMP-3-si RNA-1組、MMP-3-si RNA-2組、MMP-3-si RNA-3組,以Lipofectamine 2000分別轉(zhuǎn)染血管平滑肌細胞,48 h后,以實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測血管平滑肌細胞MMP-3信使核糖核酸(m RNA)的表達水平,篩選干擾效率最高的si RNA作為實驗對象。血管平滑肌細胞隨機分為4組:對照組、血小板源生長因子(PDGF)組、Lipofectamine 2000+PDGF組及MMP-3-si RNA-1+PDGF組;用si RNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞,以四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測血管平滑肌細胞增殖。結(jié)果:實時定量PCR顯示,三對互補干擾片段均有不同程度的干擾效果,與對照組比較,MMP-3-si RNA-1組、MMP-3-si RNA-2組和MMP-3-si RNA-3組的m RNA水平明顯降低,分別降低了81%、64%和22%。以MMP-3-si RNA-1組的干擾效率最高。蛋白免疫印跡法分析結(jié)果亦顯示MMP-3-si RNA-1組的干擾效率最高。四甲基偶氮唑鹽比色法檢測吸光度值結(jié)果顯示,與PDGF組相比,MMP-3-si RNA-1+PDGF組轉(zhuǎn)染能顯著降低PDGF誘導(dǎo)血管平滑肌細胞增殖的吸光度值,抑制率為36.1%(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:靶向MMP-3基因si RNA序列,能顯著降低平滑肌細胞MMP-3 m RNA和蛋白水平,抑制細胞增殖。靶向MMP-3基因干擾RNA可能成為血管增殖性疾病治療的新靶點。
[Abstract]:Objective: to study the effect of small interfering ribonucleic acid siRNAs targeting matrix metalloproteinase-3 gene on proliferation of vascular smooth muscle cells in rats. Methods: three pairs of nuclei targeting matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) in spontaneously hypertensive rats were constructed. The vascular smooth muscle cells cultured in vitro were randomly divided into control group (Lipofectamine 2000) group, MMP-3-si RNA-1 group, MMP-3-si RNA-2 group and MMP-3-si RNA-3 group. After transfection of vascular smooth muscle cells with Lipofectamine 2000 for 48 h, the expression of MMP-3 mRNA mRNA in vascular smooth muscle cells was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR). Si RNA, which has the highest interference efficiency, was selected as the experimental object. Vascular smooth muscle cells were randomly divided into four groups: control group, platelet derived growth factor (PDGF) group, Lipofectamine 2000 PDGF group and MMP-3-si RNA-1 PDGF group, the vascular smooth muscle cells were transfected with si RNA in vitro. The proliferation of vascular smooth muscle cells was detected by MTT colorimetry. Results: Real-time quantitative PCR showed that three pairs of complementary interference fragments had different degree of interference effects. Compared with the control group, the level of m RNA in MMP-3-si RNA-1 group and MMP-3-si RNA-3 group was significantly lower than that in MMP-3-si RNA-2 group. The interference efficiency of MMP-3-si RNA-1 group was the highest. Western blot analysis also showed that MMP-3-si RNA-1 group had the highest interference efficiency. Compared with PDGF group, the transfection of MMP-3-si RNA-1 PDGF could significantly decrease the absorbance of PDGF induced proliferation of vascular smooth muscle cells, and the inhibitory rate was 36.1% (P 0.05). Conclusion: the target MMP-3 gene si RNA sequence is significantly different from that of MMP 3-si RNA-1 PDGF group. It can significantly reduce the level of MMP-3 m RNA and protein and inhibit the proliferation of smooth muscle cells. The interference of MMP-3 gene with RNA may become a new target for the treatment of vascular proliferative diseases.
【作者單位】: 鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】:鄭州市科技攻關(guān)計劃項目(No:112PPTSF312-3)
【分類號】:R965

【參考文獻】

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本文編號:1581850


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