本文選題：血小板顆粒　切入點：止血　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：利用過期的手工匯集的血小板來制備不溶性血小板膜(Infusible platelet membrane, IPM)顆粒,并初步探索IPM顆粒的止凝血功能。 方法：從采供血機構(gòu)獲得的過期濃縮血小板經(jīng)過差速離心去除紅細胞、白細胞和血漿,用生理鹽水懸浮,放入-70℃5小時(凍)、25℃恒溫水浴溫育2小時(融),反復(fù)三次凍融破碎血小板。經(jīng)凍融破碎的血小板經(jīng)離心洗滌除去破碎細胞所釋放的內(nèi)容物。隨后,進行超聲勻漿200個循環(huán)(2S,占空比1.4：0.6),獲得大小較均一的IPM顆粒,保存于4℃。對其進行理化和功能檢測：使用納米顆粒分析儀測量IPM顆粒大小,掃描電鏡觀察顆粒形態(tài),采用SDS-PAGE電泳鑒定IPM顆粒與血小板的蛋白條帶的差異,使用流式細胞術(shù)檢測IPM顆粒表面的糖蛋白受體,利用化學(xué)發(fā)光的方法來檢測IPM顆粒凝血酶生成能力,最后通過流式細胞儀術(shù)檢測IPM顆粒對血小板聚集誘導(dǎo)劑的聚集反應(yīng)性。結(jié)果：通過凍融和超聲相結(jié)合的方法制備的IPM顆粒大小為150rnm左右,圓形；電泳條帶顯示IPM顆粒與血小板蛋白條帶的差異主要在分子量200-85KDa之間；表面含有糖蛋白GP Ⅰ bα (CD42b)、糖蛋白GP Ⅱb-Ⅲa (CD41/CD61)、血小板內(nèi)皮細胞粘附分子(CD31)、P-選擇素(CD62p);體外功能實驗結(jié)果表明,IPM顆粒在瑞斯托霉素(Ristocetin)和Ⅲ型膠原(Collagen-Ⅲ)誘導(dǎo)下能發(fā)生聚集。凝血酶生成實驗證實,IPM能為凝血因子X酶復(fù)合物(Tenase complex)和凝血酶生成提供催化表面,參與凝血級聯(lián)反應(yīng)。結(jié)論：本研究采用凍融和超聲相結(jié)合的方法,能夠制備得到大小均一的IPM顆粒,顆粒表面保留了與止血功能相關(guān)的蛋白受體GP Ⅰ bα GP Ⅱb-Ⅲa, CD31和CD62p。在血小板聚集誘導(dǎo)劑的刺激下IPM顆�？梢园l(fā)生聚集反應(yīng),初步表現(xiàn)為止血功能,根據(jù)本課題的研究結(jié)果,預(yù)測IPM顆粒有望成為一種新的止血劑。
[Abstract]:Aim: to prepare insoluble platelet membrane (IPM) granules by using expired hand collected platelets and to explore the anticoagulant function of IPM granules. Methods: the expired concentrated platelets obtained from the blood collection and supply institutions were separated by differential centrifugation to remove red blood cells, white blood cells and plasma, and were suspended with normal saline. Put in -70 鈩，

本文編號：1559325