本文選題：羧胺三唑　切入點(diǎn)：炎癥性腸病　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases, IBD)是一種慢性、復(fù)發(fā)性的腸道炎癥性疾病,包括克羅恩病(Crohn's disease, CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis, UC),在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率和致死率均呈逐年上升趨勢(shì),但它的確切病因及具體病理機(jī)制仍未清晰。氨基水楊酸類、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑以及生物制劑是目前臨床上用于治療IBD的主要藥物,但是它們由于長期應(yīng)用副作用大、僅對(duì)部分患者有效、療效不穩(wěn)定或價(jià)格昂貴等原因,在使用時(shí)受到一定的限制。因此,尋找新型IBD治療藥物意義重大。羧胺三唑(carboxyamidotriazole, CAI)是一種非細(xì)胞毒類抗癌藥物,在體內(nèi)外模型中均顯示出抑制腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移的作用,并且還可以抑制血管新生。此外,本課題組通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí),CAI在一系列急、慢性炎癥模型及自身免疫性疾病模型中均顯示出良好的抗炎效果。在這些模型中,CAI可以明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物炎癥部位和血清中促炎細(xì)胞因子的水平,而這些細(xì)胞因子過分表達(dá)對(duì)IBD的發(fā)病與病理改變具有重要影響,同時(shí)它們的表達(dá)受到NF-κB和NLRP3炎癥體激活的雙重影響。因此,我們建立了TNBS誘導(dǎo)的大鼠化學(xué)誘導(dǎo)性結(jié)腸炎模型,來探討CAI對(duì)結(jié)腸炎的治療效果和其是否是通過調(diào)控NF-κB和NLRP3炎癥體激活而發(fā)揮作用。研究方法采用TNBS誘導(dǎo)的大鼠化學(xué)誘導(dǎo)性結(jié)腸炎模型,觀察并測(cè)試大鼠體重、糞便和便血情況,從疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分、宏觀評(píng)分、病理組織學(xué)評(píng)分和各種炎癥相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo),如MPO活性及l(fā)ipocalin-2水平等方面評(píng)價(jià)CAI的治療效果。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)造模7天后大鼠結(jié)腸組織與血清內(nèi)各種細(xì)胞因子含量,包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-18和TGF-β的水平。采用RT-qPCR法檢測(cè)mRNA水平上NLRP3、ASC和caspase-1的含量。采用Western blot法或免疫組織化學(xué)方法測(cè)定蛋白水平上NF-κB信號(hào)通路與NLRP3炎癥體中各因子含量,包括NF-κB p65、IκBα與p-IκBα、NLRP3、ASC、pro-caspase-1與caspase-1、IL-1β與IL-18的前體和成熟體蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果1.80mg/kg的TNBS-50%乙醇溶液可以成功誘導(dǎo)大鼠化學(xué)誘導(dǎo)性結(jié)腸炎,其腸道改變與CD的病理變化相似。模型大鼠表現(xiàn)為腸腔狹窄,腸壁增厚,黏膜充血、水腫、潰瘍或肉芽腫形成,黏膜炎癥細(xì)胞浸潤(以中性粒細(xì)胞為主)、隱窩結(jié)構(gòu)破壞和杯狀細(xì)胞缺失等。2. CAI (10、20、40mg/kg)可以顯著改善模型大鼠體重降低情況及DAI評(píng)分。CAI(20、40mg/kg)可以顯著改善脾大、結(jié)腸長度縮短情況,降低動(dòng)物宏觀評(píng)分與組織學(xué)評(píng)分。CAI(40mg/kg)能夠降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物結(jié)腸重量的增加。3.整體觀察時(shí)可見CAI (20、40mg/kg)組大鼠結(jié)腸充血、腸結(jié)節(jié)、腸壁增厚等癥狀顯著緩解,黏膜破損范圍較��；組織學(xué)觀察時(shí)可見CAI(10、20、40mg/kg)組大鼠黏膜損害累及范圍縮小,中性粒細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞缺失以及隱窩結(jié)構(gòu)破壞程度明顯減輕。4. 與正常對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組大鼠腸組織中的MPO活性及血清中的lipocalin-2水平等炎癥相關(guān)指標(biāo)明顯上調(diào)(P0.01),同時(shí)腸道通透性增加,血清中的FITC-dextran水平升高。經(jīng)CAI治療后,MPO活性、lipocalin-2和FITC-dextran水平均降低,腸道通透性明顯下降。5.與正常對(duì)照組相比,TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織勻漿中的TNF-α、IL-1β、IL-6、 IL-10、IL-17A、IL-18和TGF-p水平和血清中的TGF-β水平均顯著升高(P0.01),經(jīng)CAI治療后降低,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6. Western Blot的檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織內(nèi)IL-1β及IL-18前體及成熟體蛋白含量均升高(P0.01),經(jīng)CAI治療后,pro-IL-1β、IL-1βp17、pro-IL-18和IL-18 p18四種蛋白的表達(dá)均明顯降低。7. 免疫組化的檢測(cè)結(jié)果顯示,正常對(duì)照組大鼠結(jié)腸組織內(nèi)NF-κB p65表達(dá)很少,多見于細(xì)胞胞漿內(nèi)。經(jīng)TNBS誘導(dǎo)后,NF-κB p65的陽性表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01),并且多見于細(xì)胞核。經(jīng)CAI治療后,NF-κB p65陽性表達(dá)明顯下調(diào),細(xì)胞核與胞漿內(nèi)的染色程度均降低。8. Western Blot的檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織內(nèi)p-IκBα的水平明顯上調(diào),而IκBα的水平明顯降低(均P0.01)。CAI能夠顯著抑制TNBS引起的大鼠結(jié)腸組織內(nèi)IκBα降解及p-IκBα水平的上調(diào)。9. RT-qPCR的檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織內(nèi)NLRP3和caspase-1的mRNA水平顯著上調(diào)(均P0.01),經(jīng)CAI治療后明顯降低,而ASC的mRNA水平在各組間未發(fā)生明顯改變。10. Western Blot和免疫組織化學(xué)的檢測(cè)結(jié)果均顯示,與正常對(duì)照組相比,TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸組織內(nèi)NLRP3和caspase-1的蛋白含量明顯升高(均P0.01),經(jīng)CAI治療后降低,而ASC的蛋白表達(dá)水平在各組間未發(fā)生明顯改變。結(jié)論CAI對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎有較好的治療效果。整體水平與組織細(xì)胞水平的研究顯示,CAI可以改善模型大鼠疾病嚴(yán)重程度,抑制腸黏膜炎性反應(yīng),保護(hù)和維持腸道的完整性,在臨床癥狀和病理改變方面抑制并緩解結(jié)腸炎的發(fā)展。我們認(rèn)為,CAI的治療作用與其較強(qiáng)的抗炎能力有關(guān)。CAI能夠抑制促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生,如降低組織中升高的TNF-α、IL-1β、IL、IL-17A以及IL-18的含量。CAI對(duì)組織和血清中TGF-β的表達(dá)水平也有下調(diào)作用,提示CAI可能有抗纖維化的作用,可以減緩結(jié)腸組織中膠原纖維的沉積。同時(shí),CAI能夠抑制NF-κB信號(hào)通路以及NLRP3炎癥體激活,從而減輕腸道炎性損害,改善多種炎癥癥狀。綜上所述,我們可以推測(cè),CAI可作為一種口服治療IBD的潛在的候選藥物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：1556987