本文關(guān)鍵詞： 利福平 膽流 碳酸氫鹽 肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體 離子交換體2　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：利福平作為一種一線抗結(jié)核藥物已在臨床上廣泛的應(yīng)用。我們先前的研究顯示,利福平可以誘導(dǎo)膽汁淤積適應(yīng)性模型,但有報(bào)道表明利福平在多次處理大鼠及分離灌注大鼠肝臟的系統(tǒng)中介導(dǎo)膽流增加,這些結(jié)果提示利福平可能在膽流消弱的生理和病理狀態(tài)下產(chǎn)生有益的作用；然而其利膽的機(jī)制是未知的。本文在體內(nèi)條件下研究利福平介導(dǎo)膽流主要組分變化的基礎(chǔ)上,從肝臟質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白的表達(dá)和定位、膽流中利福平的含量以及肝內(nèi)膽管系統(tǒng)在利膽中的作用等不同途徑,初步探討了利福平介導(dǎo)大鼠膽流變化的分子機(jī)制。一. 利福平多次灌胃處理大鼠介導(dǎo)的膽流變化及其機(jī)制探討分別給予SD大鼠利福平(50 mg/kg·d,100 mg/kg·d,250 mg/kg·d)灌胃1天、3天和7天。末次給藥24 h后,總膽管插管收集膽汁1h,取血清和肝臟組織用于后續(xù)試驗(yàn)。結(jié)果顯示,中、高劑量組利福平灌胃1、3、7天后,膽流顯著增加(P0.05),低劑量組只有灌胃7天后膽流顯著增加(P0.05)；膽流中總膽鹽和GSH的輸出在各劑量組之間無明顯差異,碳酸氫鹽輸出中、高劑量組在各時(shí)間點(diǎn)顯著高于對照組(P0.01),低劑量組在灌胃7天后碳酸氫鹽輸出顯著增加(P0.01),碳酸氫鹽輸出的增加提示其作為利膽的一個(gè)重要因素。血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),在各時(shí)間點(diǎn)高劑量組ALT顯著增高(P0.05)；3天時(shí)高劑量組ALP顯著增高(P0.05),7天時(shí)中、高劑量組ALP顯著增高(P0.01)；在各時(shí)間點(diǎn)高劑量組TBA顯著增高(P0.01),在3、7天時(shí)中劑量組TBA顯著增高(P0.05)；各組ALT無顯著差異。為了探討利福平多次處理大鼠介導(dǎo)的膽流變化的機(jī)制,選擇研究中劑量組利福平(100 mg/kg·d)引起的大鼠肝臟主要輸出轉(zhuǎn)運(yùn)體的變化。Real-time PCR結(jié)果顯示,膽汁酸輸出泵(Bsep)和陰離子交換蛋白2(AE2)在不同處理時(shí)間組的轉(zhuǎn)錄水平無顯著差異,7天組的多藥抵抗相關(guān)蛋白2(Mrp2)轉(zhuǎn)錄水平顯著高于其他時(shí)間組(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,Mrp2在不同處理時(shí)間組的蛋白水平無顯著差異,處理組的Bsep和AE2蛋白水平顯著高于對照組(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,Bsep, Mrp2口AE2主要定位在肝細(xì)胞質(zhì)膜。提示肝臟小管側(cè)輸出轉(zhuǎn)運(yùn)體AE2在利福平多次處理大鼠介導(dǎo)膽流變化過程中具有重要作用。二. 利福平急性靜脈灌注大鼠介導(dǎo)的膽流變化及其機(jī)制探討大鼠髂靜脈插管后,給予不同劑量的利福平(0.5,1,2.5,5 and 20 mg/ml)連續(xù)灌注(1.5 ml/h),總膽管插管后收集膽汁用于后續(xù)試驗(yàn)。結(jié)果顯示,膽流在0.5 mg/ml灌注劑量時(shí)無顯著變化,膽流在1-5 mg/ml灌注劑量時(shí)顯著增多(P0.05),在20 mg/ml灌注劑量時(shí)顯著降低(P0.05)。膽汁成分分析顯示,在0.5 mg/ml灌注劑量時(shí)成分無顯著變化,在1-5 mg/ml灌注劑量時(shí)碳酸氫鹽輸出量顯著增加,在20 mg/ml灌注劑量時(shí)總膽鹽輸出量顯著下降(P0.01)。高效液相色譜結(jié)果顯示,隨著利福平灌注劑量的增加,膽汁中利福平的含量也遞增,但是與膽流的增加無相關(guān)性,提示膽汁中利福平的含量并不是利膽的因素。由于單次給予1 mg/ml劑量的利福平產(chǎn)生最大的利膽效果,我們選取此劑量作為隨后研究的最佳劑量。為了探討利膽相關(guān)機(jī)制是否包括膽肝循環(huán),我們對大鼠門靜脈插管后,單次分別灌注利福平、�；悄懰�(介導(dǎo)利膽但不參與膽肝循環(huán)的陰性對照)和熊去氧膽酸(介導(dǎo)利膽并參與膽肝循環(huán)的陽性對照)。結(jié)果顯示,�；悄懰釂未谓o藥后20分鐘膽流率顯著升高,30分鐘后膽流率降低到對照水平；而熊去氧膽酸單次給藥后20分鐘膽流率顯著升高,膽流率達(dá)到最大后開始下降,但是在30至40分鐘時(shí)有一個(gè)明顯的利膽延長的效果；對比之下,利福平的膽流率曲線的趨勢與牛磺膽酸相同,并沒有產(chǎn)生延長的利膽效果。以上結(jié)果表明利福平并不是通過膽肝循環(huán)介導(dǎo)碳酸氫鹽的利膽。為了進(jìn)一步探討利福平對膽流的影響,我們實(shí)施了膽管逆行灌注實(shí)驗(yàn)。大鼠髂靜脈和總膽管插管后,平衡10分鐘,髂靜脈連續(xù)灌注1 mg/ml劑量的利福平(1.5ml/h),總膽管逆行灌注0.2 ml (0.5 mmol/1)的AE2抑制劑4,4'-diisothiocyanatostilbene-2,2'-disulfonic acid (DIDS)后夾閉總膽管,20分鐘后打開總膽管收集膽汁。結(jié)果顯示,膽管逆行給予DIDS后,增加的膽流顯著降低(P0.01),增加碳酸氫鹽輸出也顯著降低(P0.01)；提示膽管上皮細(xì)胞AE2活性的增加是利福平介導(dǎo)膽流變化的重要機(jī)制之本研究結(jié)論如下：(1)利福平處理引起大鼠的膽流增加；膽流中增加的碳酸氫鹽的輸出是利福平所致利膽主要因素；(2)利福平引起的利膽與膽汁中利福平的含量無關(guān)；(3)利福平不是通過膽肝循環(huán)介導(dǎo)的利膽；(4)DIDS阻斷AE2活性后可以大部分阻斷利福平介導(dǎo)的膽流和碳酸氫鹽輸出,說明膽管細(xì)胞AE2的活性的增加是利膽的機(jī)制之一
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965

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本文編號：1543482