本文關(guān)鍵詞： 受體酪氨酸激酶抑制劑 索拉非尼 吲唑雙芳基脲衍生物 抗腫瘤　出處：《山東大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：受體酪氨酸激酶抑制劑是一類具有分子靶向作用的小分子化療藥物,它的出現(xiàn)填補(bǔ)了傳統(tǒng)化療藥物缺乏腫瘤細(xì)胞針對性的空白,并在臨床應(yīng)用中取得了很好的療效。索拉非尼是受體酪氨酸激酶抑制劑的代表藥物,其口服有效且對大部分的激酶都有很強(qiáng)的抑制作用,顯示了其很好的抗癌活性,廣泛用于肝癌、腎細(xì)胞腎癌和非小細(xì)胞肺癌的化療。但是,索拉非尼也有不足之處,特別是肝臟毒性、腎毒性和心臟循環(huán)系統(tǒng)的毒副作用,嚴(yán)重影響了索拉非尼的應(yīng)用。對索拉非尼進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造以期獲得更高療效、更好臨床使用效果的化合物成為研究熱點(diǎn)。1122-37是吲唑基取代的雙芳基脲類衍生物,前期研究結(jié)果表明其對很多腫瘤細(xì)胞株抑制作用優(yōu)于索拉非尼,本研究采用多種體外實(shí)驗(yàn)方法對1122-37抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制新生血管形成等方面作用進(jìn)行了研究。 方法：本課題利用MTT比色法評價1122-37對人肝癌細(xì)胞株P(guān)LC/PRF/5的增殖抑制作用；利用Hoechst染色法和PI/Annexin V雙染法評價1122-37對PLC/PRF/5的凋亡誘導(dǎo)作用；利用碘化丙錠染色法評價1122-37對PLC/PRF/5的周期阻滯作用；Western Blotting法對1122-37上述作用的可能機(jī)制進(jìn)行分子生物學(xué)層面的探討；利用基質(zhì)膠微管形成試驗(yàn)和Western Blotting法對1122-37抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC的增殖和微血管形成的作用及其分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行探究。 結(jié)果：MTT法評價1122-37的抗增殖作用結(jié)果顯示,1122-37(0.2～25gM)能明顯抑制PLC/PRF/5的增殖且呈現(xiàn)劑量依賴性,1122-37對PLC/PRF/5細(xì)胞72h作用IC50值為4.34μM,而索拉非尼為11.39μM,在抑制PLC/PRF/5增殖方面1122-37優(yōu)于索拉非尼。Hoechst33258染色、FITC-Annexin V/PI雙染法及western blotting評價1122-37的凋亡誘導(dǎo)作用顯示,1122-37(1.25～5μM)處理后的PLC/PRF/5出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞核深染,部分細(xì)胞出現(xiàn)染色質(zhì)固縮或聚至核膜周邊呈月牙形,整體呈現(xiàn)劑量依賴性；1.25,2.5和5μM1122-37處理24h組PLC/PRF/5細(xì)胞凋亡率分別為16.08%,24.73%和29.26%；1122-37可能通過下調(diào)Mcl-1的表達(dá)激活caspase凋亡途徑發(fā)揮作用。碘化丙啶染色法及western blotting評價1122-37的細(xì)胞周期組織作用顯示,1.25,2.5和5μM1122-37處理24h組細(xì)胞G1期的百分比分別為78.67%,80.98%和83.03%；1122-37可能通過下調(diào)G1期關(guān)鍵蛋白cyclin D1的表達(dá)發(fā)揮作用。Western blotting對細(xì)胞內(nèi)受體及相關(guān)激酶、通路的檢測顯示1122-37能夠通過抑制受體酪氨酸激酶c-Kit的磷酸化抑制其下游的Ras/Raf/MEK/ERK通路和PI3K/Akt通路,還能夠抑制Wnt/β-Catenin通路的活性從而抑制了包括Mcl-1、cyclin D1在內(nèi)的一些凋亡抑制、促增殖因子,如survin、 PCNA和c-MyC。1122-37作用于HUVEC細(xì)胞的MTT試驗(yàn)、微管形成試驗(yàn)及western blotting評價1122-37的抗血管生成作用結(jié)果顯示,1122-37(5-25μM)可顯著抑制HUVEC細(xì)胞的增殖；1.25,2.5,5gM1122-37作用18h管腔結(jié)構(gòu)隨1122-37濃度升高依次減少,平均每視野有復(fù)雜分支的點(diǎn)數(shù)分別為16,15,9個；1122-37可能通過下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子VEGF的表達(dá)及其受體VEGFR-2的磷酸化水平發(fā)揮作用。 結(jié)論：1122-37顯著抑制PLC/PRF/5細(xì)胞增殖,主要通過對受體酪氨酸激酶c-Kit及其下游通路的抑制和阻滯Wnt/β-Catenin通路使細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡因素受到抑制；1122-37能夠抑制HUVEC細(xì)胞的增殖和血管生成,與抑制VEGF表達(dá)和VEGFR-2磷酸化作用有關(guān)；1122-37的作用明顯高于索拉非尼。
[Abstract]:Background : Receptor tyrosine kinase inhibitor is a class of small molecule chemotherapeutic drugs with molecular targeting effect . It has been used to fill the blank of tumor cells in traditional chemotherapeutic drugs . Methods : The proliferation inhibitory effect of 1122 - 37 on PLC / PRF / 5 was evaluated by MTT colorimetric method . The effects of 1122 - 37 on the apoptosis of PLC / PRF / 5 were evaluated by MTT colorimetric method . The possible mechanism of 1122 - 37 on PLC / PRF / 5 was evaluated by propidium iodide staining . Western Blotting method was used to evaluate the effects of 1122 - 37 on the proliferation of human umbilical vein endothelial cells ( HUVEC ) and the mechanism of molecular biology . Results : The results of MTT assay showed that 1122 - 37 ( 0.2 ~ 25gM ) inhibited the proliferation of the PLC / PRF / 5 cells and showed dose - dependent effect . CONCLUSION : 1122 - 37 significantly inhibited the proliferation of PLC / PRF / 5 cells . The inhibition of the receptor tyrosine kinase c - Kit and its downstream pathway and the blocking of Wnt / 尾 - Cavities pathway inhibited the proliferation of HUVEC cells and angiogenesis , which was associated with the inhibition of VEGF expression and the phosphorylation of VEGFR - 2 ; the effect of 1122 - 37 was significantly higher than that of sordid .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1533462