本文關(guān)鍵詞： N-乙酰半胱氨酸 活性炭 緩釋微囊 口服 肝纖維化　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究利用乳化交聯(lián)法制備N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊(NCSM),優(yōu)化制備工藝,考察其制劑學(xué)和藥代動力學(xué)參數(shù),進(jìn)一步研究微囊口服給藥對大鼠肝纖維化的治療作用,并與N-乙酰半胱氨酸溶液和市售經(jīng)典抗肝纖維化藥物水飛薊賓口服給藥進(jìn)行比較。目的：N-乙酰半胱氨酸(NAC)作為谷胱甘肽的前體,其抗氧化性對肝纖維化病變的治療作用已日漸受到關(guān)注,目前臨床給藥途徑為靜脈注射,但因其在體內(nèi)的快速代謝,無法形成穩(wěn)定持久的血藥濃度,且臨床注射給藥依從性較差。N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊通過消化道的緩釋作用,形成較為穩(wěn)定的血藥濃度,延長藥物作用時間,開辟N-乙酰半胱氨酸口服治療肝纖維化給藥途徑,增加患者依從性。方法：①處方前研究。建立N-乙酰半胱氨酸高效液相色譜測定方法,制備活性炭載藥體,選擇明膠為囊材,(去除了聚丙烯酸樹脂Ⅱ/Ⅲ)采用乳化交聯(lián)法建立N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊制備方法。②優(yōu)化N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊制備工藝。利用正交試驗(yàn)L9(34),考察藥載比、明膠濃度、攪拌速度和乳化劑濃度4因素對活性炭載藥囊芯的載藥量、包封率和粒徑分布的影響,得出最佳微囊制備工藝,評價微囊質(zhì)量。③考察N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊體外釋放情況及體內(nèi)血藥濃度變化,評價NCSM緩釋效果。④考察NCSM口服給藥對四氯化碳(CC14)所致大鼠肝纖維化的治療作用。建立CCl4致大鼠肝纖維化模型,以NCSM高中低三個劑量：80mg·kg-1·D-1、40mg·kg-1·D-1、20mg·kg-1·D-1(按照乙酰半胱氨酸計算),NAC、水飛薊賓作為陽性對照藥物,進(jìn)行灌胃給藥。治療8周后處死大鼠,比較其不同給藥劑量與NAC和水飛薊賓對大鼠肝纖維化的治療作用,探討其對肝纖維化大鼠肝功能指標(biāo)、肝纖維化病理學(xué)及大鼠肝纖維化成纖細(xì)胞信號通路(TGF-β1/TβR-Ⅰ/Smad2/3)的影響,評價口服NCSM對肝纖維化模型大鼠的治療效果。結(jié)果：①通過試制,確定成囊效果較好的明膠作為囊材進(jìn)行N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊的制備工藝的研究。②正交試驗(yàn)L9(34)結(jié)果表明,成囊效果影響由大到小依次為藥載比(藥物與明膠的比例)攪拌速度明膠濃度乳化劑濃度。藥載比為1：1,明膠濃度為15%,攪拌速度為1000 r·min-1和乳化劑(Span-80)濃度為2%的條件下,制備的NCSM粒徑均勻,載藥量,包封率高。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明,該工藝成囊質(zhì)量穩(wěn)定,確認(rèn)為N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊的最佳制備工藝。制備三批NCSM,平均粒徑為110.4μm±13.59μm,粒徑分布在80-140 μm的微囊占總數(shù)81.9%,平均包封率為78.1%,平均載藥量為15.9%。③體外釋放結(jié)果表明,NCSM在1h內(nèi)累計釋放為20.4%,24h為69.2%,符合一級動力學(xué)方程。小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)結(jié)果表明,口服微囊的t1/2為NAC的3.32倍,AUC(o-24)為NAC1.18倍,具有明顯緩釋作用。④CCl4致大鼠肝纖維化模型制備成功,其大鼠肝組織病理切片HE染色和網(wǎng)狀纖維染色表明其肝纖維化程度為Ⅲ-Ⅳ期,免疫組化顯示胞內(nèi)TGF-β1/TβR-Ⅰ和Smad2/3大量表達(dá)。NCSM各治療組大鼠肝組織病理切片表明肝纖維化好轉(zhuǎn),免疫組化顯示胞內(nèi)TGF-β1/TβR-Ⅰ和Smad2/3表達(dá)減少,NCSM高劑量組(80mg·kg-1·D-1)表達(dá)具顯著性差異(p0.05)。結(jié)論：采用乳化交聯(lián)法制備的N-乙酰半胱氨酸活性炭緩釋微囊,粒徑均勻,載藥量和包封率穩(wěn)定。通過口服給藥途徑,與NAC比較,血藥濃度維持時間顯著增加,生物利用度顯著提高,達(dá)到緩釋作用。NCSM對大鼠肝纖維化有較好地治療作用,且較等劑量的NAC及對照藥物水飛薊賓有更顯著的療效,其作用機(jī)制可能與抑制大鼠肝纖維化胞內(nèi)成纖信號分子TGF-β/TβR-1和Smad2/3有關(guān)。
[Abstract]:The study on Preparation of activated carbon N- acetylcysteine microcapsules by emulsion crosslinking method (NCSM), to optimize the preparation process, the preparation and pharmacokinetic parameters, further study on microcapsule oral administration on hepatic fibrosis in rats and the therapeutic effect of N- acetylcysteine solution and commercially available classic anti fibrosis drug silymarin Philippines oral administration were compared. Objective: N- acetylcysteine (NAC) as a precursor for glutathione and its antioxidant role in treatment of liver fibrosis has been increasingly concerned, the current clinical administration for intravenous injection, but because of its rapid metabolism in vivo, unable to form a stable blood concentration and lasting. Clinical injection poor adherence of.N- acetylcysteine activated carbon microcapsules by sustained release of digestive function, forming a relatively stable plasmaconcentration, prolong drug action time, open N- B Cysteine oral treatment of liver fibrosis and route of administration, increase the compliance of patients. Methods: the study before prescription. To establish a method for determination of N- acetylcysteine, HPLC, preparation of activated carbon loaded, gelatin was selected as the wall materials (removal of polyacrylic resin II / III) by emulsion crosslinking method to establish the N- acetyl cysteine activated carbon release microcapsule preparation method. The optimization of N- acetylcysteine activated carbon microcapsules preparation. By orthogonal test L9 (34), the investigation of drug loading ratio, gelatin concentration, stirring speed and loading concentration of emulsifier 4 factors on activated carbon loaded bag core, influence the encapsulation efficiency and particle size distribution the optimum preparation process of microcapsules, and evaluate the quality of microcapsule. The effects and changes of blood concentration in vivo release of N- acetylcysteine activated carbon microcapsules in vitro release effect. The evaluation of NCSM effects of NCSM given orally for four Carbon tetrachloride (CC14) treatment induced liver fibrosis in rats. Establishing a rat model of hepatic fibrosis induced by CCl4 in NCSM three intervendonal: 80mg - kg-1 - D-1,40mg - kg-1 - D-1,20mg - kg-1 - D-1 (calculated by N-acetylcysteine), NAC, silybin was used as positive control drug, respectively intragastric administration. After 8 weeks of treatment, the rats were sacrificed to compare the therapeutic effect and NAC dosage and silymarin on liver fibrosis in rats, to explore the index of liver function in rats with liver fibrosis, and liver fibrosis rat fibroblast signaling pathway in liver fibrosis (TGF- beta 1/T beta R- I /Smad2/3) effect, to evaluate the therapeutic effect of oral NCSM on liver fibrosis model rats. Results: 1. Through trial research to determine the preparation process of microcapsules better effect of gelatin as capsule material of N- acetylcysteine activated carbon microcapsules. The orthogonal test of L9 (34). The results show that the sacculation effect from high to low is drug load ratio (the ratio of drug and gelatin) stirring speed of gelatin concentration of emulsifier concentration. Drug loading ratio was 1:1, the concentration of gelatin was 15%, stirring speed was 1000 R - min-1 and emulsifier (Span-80) concentration is 2%, the preparation of NCSM uniform particle size, drug loading, encapsulation rate was high. The testing results show that the process of sacculation stable quality and confirm the optimal conditions for the preparation of activated carbon N- acetylcysteine microcapsules. The preparation of the three batch of NCSM, the average particle size of 110.4 m + 13.59 m, accounting for 81.9% of the total number in particle size distribution was 80-140 m, the average entrapment rate was 78.1%, the average drug loading was 15.9%., the in vitro release results showed that NCSM in 1H cumulative release was 20.4%, 24h was 69.2%, with a kinetic equation. In vivo pharmacokinetic results showed that oral administration of t1/2 microcapsules was 3.32 times NAC, AUC (o-24 NAC1) .18 times, has obvious sustained-release effect. The CCl4 induced rat liver fibrosis model was successfully prepared, the rat liver tissue HE staining and reticular fiber staining showed that the liver fibrosis degree III - IV period, immunohistochemistry showed that intracellular TGF- beta 1/T beta R- I and Smad2/3 expression of.NCSM in the treatment of liver group the pathological sections showed that liver fibrosis improved, immunohistochemistry showed decreased expression of TGF- beta 1/T beta R- I and Smad2/3 cells in high dose group of NCSM (80mg kg-1 D-1) expressed significant difference (P0.05). Conclusion: using emulsion crosslinking method to prepare N- acetyl cysteine activated carbon microcapsules, uniform particle size, entrapment efficiency and drug loading stability. Through the oral route of administration, compared with NAC, significantly increased the blood concentration of maintenance time, improve the bioavailability, achieve sustained release effect.NCSM has better therapeutic effect on liver fibrosis in rats, and the dose The NAC and the control drug silybin had a more significant effect. The mechanism may be related to inhibiting the intracellular fibroblast signaling molecules TGF-, /T, beta R-1 and Smad2/3 in rat liver fibrosis.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R96

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本文編號：1526996