發(fā)布時間：2018-02-14 11:57

  本文關鍵詞： 膽固醇-半乳糖苷 放大合成 制劑 穩(wěn)定性 配伍　出處：《廣州中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:膽固醇-半乳糖苷是本實驗室利用非水相酶促合成法研制的新型配體,可以與磷脂制成配體脂質(zhì)體納米粒,研究發(fā)現(xiàn),其脂質(zhì)體的肝細胞攝取率相較于普通脂質(zhì)體增加了 2-5倍。目前實驗室已成功制成了膽固醇-半乳糖苷介導的藥物脂質(zhì)體。但是目前對膽固醇-半乳糖苷的合成還處于小試試驗階段,很多參數(shù)都不完善,因此本文對膽固醇-半乳糖苷的酶促合成工藝技術(shù)進行了放大,通過放大試驗完善了其合成純化的工藝路線。并將放大后的膽固醇-半乳糖苷用于制備紫杉醇配體脂質(zhì)體;之后對膽固醇-半乳糖苷介導的紫杉醇配體脂質(zhì)體制劑進行了穩(wěn)定性試驗、制劑配伍試驗以及急性毒性研究。方法:1.在對膽固醇-半乳糖苷進行中試放大的過程中,使用逐步放大的方法,先將其放大至小試時的5倍,在5倍條件下以產(chǎn)率及純度作為評判指標,對膽固醇-半乳糖苷合成及純化過程中的處方工藝流程進行優(yōu)化,使最終產(chǎn)物的產(chǎn)率90%,純度95%,然后使用優(yōu)化后的處方工藝將反應放大至小試時的50倍,方法同上。2.以紫杉醇標準品作為外標,在HPLC條件下,建立紫杉醇配體脂質(zhì)體含量測定的方法學。3.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對象,分別進行高溫(40℃)、高濕(25℃,RH70%±5%)、強光(4500±5001x)穩(wěn)定性試驗,試驗時長設置為10天,于第0、5、10天取樣,測包封率、Zeta電位、粒徑、pH值、氧化指數(shù)等指標;并考察其加速(30±2℃,RH65%±5%)穩(wěn)定性,試驗時長設置為6個月,于第0、1、2、3、6個月取樣,測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標。4.以紫杉醇脂質(zhì)體的凍干粉作為研究對象,使用0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化鈉注射液、50%葡萄糖注射液四種輸液分別與其配伍,試驗時長設置為24h,于0、4、8、12、24h取樣測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數(shù)等指標。5.使用單次給藥注射,以紫杉醇配體脂質(zhì)體凍干粉作為研究對象,普通紫杉醇脂質(zhì)體凍干粉作為對照,使用0.9%氯化鈉注射液溶解藥物,試驗動物選用SPF級小鼠,首先通過預實驗確定兩種脂質(zhì)體的最大安全劑量和最小致死劑量,然后根據(jù)公示(r為兩劑量組時間的比值,n為預分組數(shù),a最小致死劑量,b為最大安全劑量)確定最終實驗分組以及每組注射劑量,注射后放置14天,觀察小鼠死亡情況并記錄,計算兩種脂質(zhì)體的LD50,并進行比較。結(jié)果:1.在將膽固醇-半乳糖苷放大至50倍后,通過對乳糖醇和膽固醇-單乙烯酯的摩爾比、酶的種類及用量、混合溶劑的比例等因素單因素考察以及正交試驗,最終得到的產(chǎn)物產(chǎn)率約為96%,純度約為95%。2.在對HPLC法測定紫杉醇配體脂質(zhì)體內(nèi)藥物含量進行方法學考察時,結(jié)果顯示,脂質(zhì)體內(nèi)的其他物質(zhì)不影響紫杉醇的含量測定,精密度、回收率等顯示結(jié)果良好。3.穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明,脂質(zhì)體在高溫、高濕、強光照射條件下包封率、粒徑、電位等指標均未產(chǎn)生顯著變化;加速穩(wěn)定性試驗中脂質(zhì)體在3個月之內(nèi),包封率、粒徑、電位等指標均未產(chǎn)生顯著變化,至6個月時包封率等出現(xiàn)較大下降。4.配伍穩(wěn)定性顯示,脂質(zhì)體凍干粉在于0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化鈉注射液、50%葡萄糖注射液四種輸液分別配伍后,在24h內(nèi)包封率、粒徑、電位等指標均未產(chǎn)生顯著變化。5.急性毒性預試驗中,得到了兩種脂質(zhì)體對小鼠的近似100%死亡的最小致死量和0%死亡的最大耐受量,普通脂質(zhì)體的為30mg/ml和20mg/ml,紫杉醇配體脂質(zhì)體的為80mg/ml和40mg/ml,正式試驗階段,通過觀察和記錄小鼠的死亡情況,最終計算得兩種脂質(zhì)體的LD50,普通紫杉醇脂質(zhì)體LD5為23.454mg/ml,其95%可信度區(qū)間范圍在22.109-24.788mg/ml;紫杉醇配體脂質(zhì)體的LD50為63.455 mg/ml,其 95%可信度區(qū)間范圍在 57.544-71.872mg/ml。結(jié)論:1.膽固醇-半乳糖苷在放大到50倍后產(chǎn)率高,純度好,穩(wěn)定性優(yōu)良,可以用于批量試制。2.用于測定紫杉醇配體脂質(zhì)體的藥物含量的HPLC法,準確性高,專屬性強,靈敏度好,可以在接下來的試驗中用于檢測紫杉醇配體脂質(zhì)體中紫杉醇藥物的含量。3.穩(wěn)定性試驗表明,在各種極端條件下,短時間內(nèi)脂質(zhì)體都可以保持良好的穩(wěn)定性,但是正常情況下不宜貯存超過3個月,而且作為注射劑時,可以很好地與多種輸液配伍,是臨床上理想的新型制劑。4.配伍穩(wěn)定性表明,紫杉醇配體脂質(zhì)體作為注射劑時,可以很好地與多種輸液配伍,是臨床上理想的新型制劑。5.急性毒性試驗表明,相比于普通脂質(zhì)體,膽固醇-半乳糖苷介導的紫杉醇配體脂質(zhì)體具有更好的安全性和更大的安全劑量范圍,這種特性可能與其肝靶向相性有關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R965
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本文編號：1510652