本文關鍵詞： 低分子肝素 二極管陣列檢測器 2-氨基吖啶酮 電噴霧電離質譜 組成分析　出處：《山東大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：肝素是一類帶有大量負電荷,異質性的線性糖胺聚糖,主要存在于細胞表面和細胞外基質中。肝素是由重復的二糖單元組成的線性多糖,重復的二糖單元由己糖醛酸(HexA)和D-葡萄糖胺(G1cN)通過1-4糖苷鍵連接形成。二糖單元中的己糖醛酸可能是p-D-葡萄糖醛酸或者是a-L-艾杜糖醛酸。己糖醛酸可能是2-O-硫酸化,葡萄糖胺可能是6-0-硫酸化,N-硫酸化,N-乙酰化或3-O-硫酸化。肝素作為臨床抗凝血藥物廣泛用于血栓性疾病的預防和治療。然而,肝素作為抗凝血藥物具有一定的副作用,如引起出血現(xiàn)象,血小板減少癥和骨質疏松癥等,因此限制了其臨床應用。 低分子量肝素(Low molecular weight heparin, LMWH)是由肝素多糖制備得到的一類新型抗凝血藥物。LMWH具有分子量低、抗血栓作用強、生物利用度高和血漿半衰期長等特點,被廣泛用于抗凝血藥物。隨著LMWH仿制藥的出現(xiàn),對LMWH結構和組成分析以及精細結構的分析鑒定是必不可少的。 我們建立了一種新的基于反相(RP)-高效液相色譜(HPLC)-二極管陣列檢測器(DAD)-電噴霧電離質譜(ESI-MS)分析方法用于LMWH精細結構組成分析。本論文中兩種低分子量肝素達肝素鈉和依諾肝素鈉用肝素酶完全降解后通過柱前衍生方法與衍生試劑2-氨基吖啶酮(AMAC)結合,應用RP-HPLC-DAD-MS方法分析達肝素鈉和依諾肝素鈉兩種低分子肝素完全降解組分,成功分離并鑒定到17種達肝素鈉完全降解組分和15種依諾肝素鈉完全降解組分,通過該實驗方法各組分能實現(xiàn)高效分離,同時實現(xiàn)了對所有組分的定性和相對定量分析。達肝素鈉和依諾肝素鈉完全降解組分中除了8種常見的肝素二糖,還含有特征性的末端結構如還原端和非還原端結構,3-O-硫酸四糖和三糖,這些結構根據(jù)色譜的保留時間和質譜的質荷比(m/z)已經(jīng)被準確分析鑒定。與傳統(tǒng)的肝素組成分析方法相比,該方法幾乎能檢測LMWH完全降解產(chǎn)物中的所有組分。
[Abstract]:Heparin is a class of linear glycosaminoglycans with a large negative charge and heterogeneity. Heparin is a linear polysaccharide consisting of repeated disaccharide units. The repeated disaccharide units are linked by hexuronic acid (HexA) and D-glucosamine (G1cN) via 1-4 glycoside bonds. The hexuronic acid in the disaccharide unit may be p-D- glucuronic acid or a-L-Alduronic acid. Hexuronic acid may be 2-O- sulfated. Glucosamine may be 6-0-sulfated N-sulfated N-acetylation or 3-O- sulfated. Heparin is widely used as a clinical anticoagulant in the prevention and treatment of thrombotic diseases. However, heparin has some side effects as anticoagulant drugs. Such as bleeding, thrombocytopenia, osteoporosis and so on, which limits its clinical application. Low molecular weight heparin (LMWHs) is a new anticoagulant. LMWH prepared from heparin polysaccharide has the characteristics of low molecular weight, strong antithrombotic effect, high bioavailability and long plasma half-life. It is widely used in anticoagulant drugs. With the appearance of LMWH generic drugs, it is necessary to analyze the structure and composition of LMWH and identify the fine structure. We have developed a new method for the analysis of fine structure of LMWH based on RP-RPP-HPLCG-diode array detector (DADI-MS). In this paper, two kinds of low-molecular weight heparin (LMWH) have been used to analyze the fine structure of LMWH. Sodium and enoxaparin sodium were completely degraded by heparinase and then combined with 2-aminoacridine ketone AMAC by pre-column derivatization. Two kinds of low molecular weight heparin (LMWH) completely degraded components were analyzed by RP-HPLC-DAD-MS method. 17 fully degraded components and 15 completely degraded components of enoxaparin sodium were successfully isolated and identified. Through this method, the components can be separated efficiently, and the qualitative and relative quantitative analysis of all the components are realized. Except for 8 kinds of heparin disaccharide, the total degradation of heparin sodium and enoxaparin sodium can be achieved. They also contain characteristic terminal structures such as reductive and non-reductive terminal structures such as tetrasugar 3-Osulfate and triose, which have been accurately analyzed and identified according to the retention time of chromatography and mass charge ratio of mass mass spectrometry (MS), compared with traditional methods for the analysis of heparin composition. This method can be used to detect almost all the components in the completely degraded products of LMWH.
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R973

【共引文獻】

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本文編號：1507902