本文關(guān)鍵詞： 肝癌 二甲雙胍 姜黃素 侵襲轉(zhuǎn)移 血管生成　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的肝細(xì)胞癌(肝癌)是一種很常見的惡性癌癥,盡管近些年來,肝癌的治療效果有所提高,但是肝癌的預(yù)后仍然很差,這很大程度地歸咎于肝癌患者確診時(shí)已處于中晚期、肝癌的高發(fā)生率以及高轉(zhuǎn)移性等因素。因此,臨床上肝癌治療的新策略更集中于尋找能夠抑制現(xiàn)有腫瘤的生長(zhǎng)、抑制肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移以及血管生成,并且具有更低毒副反應(yīng)的藥物。二甲雙胍,一種具有很好耐受性的治療糖尿病的藥物,研究表明其能夠降低多種腫瘤的風(fēng)險(xiǎn),其中包括肝癌。姜黃素是一種從姜黃的根莖中提取出來的多元酚類,具有多種藥理學(xué)的活性、較好的耐受性以及較低的毒性,并且具有較好的抗癌抗腫瘤活性。越來越多的體內(nèi)外研究表明飲食中植物化學(xué)的聯(lián)合療法相比于單一療法能夠更有效提高藥物的細(xì)胞毒性,抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本課題從細(xì)胞和動(dòng)物兩個(gè)層次觀察研究二甲雙胍聯(lián)合姜黃素對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖、調(diào)亡、侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成以及腫瘤組織生長(zhǎng)的協(xié)同抑制作用,并且初步探討了其潛在的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果實(shí)驗(yàn)方法:采用MTT法、CCK-8法、克隆形成實(shí)驗(yàn)以及裸鼠移植瘤模型檢測(cè)二甲雙胍和姜黃素合用對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖以及腫瘤生長(zhǎng)的影響。二甲雙胍和姜黃素合用對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞作用后,采用Hoechst 33342染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測(cè)HepG2細(xì)胞凋亡的比例,JC-1染色法測(cè)定HepG2細(xì)胞線粒體膜的電位,PI染色法測(cè)定HepG2細(xì)胞的周期阻滯情況。采用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)測(cè)定二甲雙胍和姜黃素合用對(duì)HepG2細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。采用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定兩藥合用對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9/2蛋白活性及表達(dá)的影響。采用劃痕實(shí)驗(yàn)和小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二甲雙胍和姜黃素對(duì)HUVEC細(xì)胞遷移以及血管形成的作用。實(shí)驗(yàn)中所有相關(guān)蛋白表達(dá)的變化均采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:二甲雙胍能夠分別在體內(nèi)、體外提高姜黃素抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖以及腫瘤生長(zhǎng)的抗腫瘤活性,并且無明顯的毒副反應(yīng)。二甲雙胍和姜黃素聯(lián)合使用能夠通過激活p53,進(jìn)而增加Bax/Bcl-2的比率以及cleaved-PARP的表達(dá),從而引起HepG2細(xì)胞線粒體通路相關(guān)的細(xì)胞凋亡。二甲雙胍和姜黃素合用能夠下調(diào)MMP9和MMP2蛋白活性及表達(dá),進(jìn)而阻止HepG2細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。兩藥合用還可以抑制HUVEC細(xì)胞遷移以及血管形成,從而阻止腫瘤細(xì)胞的血管生成能力。二甲雙胍和姜黃素共處理能夠抑制PTEN/PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路,阻止NF-κB的入核,通過抑制STAT3介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄減少VEGF的表達(dá),從而抑制HepG2細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移以及血管生成能力,這些細(xì)胞蛋白水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步在動(dòng)物瘤塊組織中得到確證。實(shí)驗(yàn)結(jié)論二甲雙胍和姜黃素聯(lián)合使用能夠在體內(nèi)和體外協(xié)同抑制肝癌的增殖能力、侵襲遷移及血管生成的作用。二甲雙胍和姜黃素共處理不僅能夠通過活化線粒體通路,從而引起細(xì)胞的凋亡,也可以通過下調(diào)MMP2和MMP9的水平以及血管生成相關(guān)因子VEGF、VEGFR2的表達(dá),從而抑制HepG2細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成能力。進(jìn)一步探討其分子機(jī)制,二甲雙胍和姜黃素通過上調(diào)PTEN、P53,抑制PI3K/Akt/mTOR/NF-κB和EGFR/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮以上作用。因此,二甲雙胍和姜黃素的聯(lián)合使用將為肝癌的治療提供一個(gè)很有前景的治療策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1498509