本文關(guān)鍵詞： 多西他賽 pH敏感脂質(zhì)體 靶向因子 癌癥研究 主動靶向　出處：《山東大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：癌癥一直嚴重危害人類的健康,我國每年新發(fā)癌癥人數(shù)為300萬左右,每年因癌癥死亡人數(shù)達到了270余萬,相當(dāng)于每一天有7300余人死于癌癥。藥物療法迄今仍然是腫瘤治療的三大方法之一。 多西他賽(docetaxel)又稱為多西紫杉醇,是由紫杉樹的針葉中提取的第二代紫杉烷類化合物。它通過阻斷微管系統(tǒng)從而阻斷有絲分裂及有絲分裂間期的細胞功能而發(fā)揮抗腫瘤作用。臨床上主要用于治療乳腺癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤等癌癥。多西他賽作為脂溶性藥物,溶解度較低,組織特異性較差,常引起中性粒細胞減少、外周神經(jīng)毒性等毒副作用。臨床上使用的制劑通過加入吐溫-80作為增溶劑易引起超敏反應(yīng)。因此選擇合適的載藥系統(tǒng)將藥物傳輸至特定的病變部位,減少全身分布,減少給藥劑量和給藥次數(shù),提高藥物的治療指數(shù),降低毒副作用是目前急需解決的問題。 腫瘤的靶向治療是利用具有一定特異性的載體,將抗腫瘤藥物定向地作用于腫瘤細胞,而不影響正常細胞或者組織的功能。與傳統(tǒng)細胞毒化療不同,腫瘤靶向治療具有治療指數(shù)高、毒副作用小的特點。因此本課題制備了兩種具有良好抗腫瘤效果的多西他賽脂質(zhì)體,提高了多西他賽的溶解度和腫瘤靶向性。1)多西他賽pH敏感脂質(zhì)體；2)靶向因子RGD修飾的多西他賽pH敏感脂質(zhì)體。pH敏感脂質(zhì)體能夠靶向低pH的腫瘤組織,發(fā)揮物理化學(xué)靶向作用,靶向因子RGD能夠靶向腫瘤細胞表面高表達的整合素受體,發(fā)揮主動靶向的作用,從而提高藥物的治療效果。本文研究了兩種脂質(zhì)體的藥劑學(xué)和生物學(xué)特征,探討了其作為腫瘤治療藥物的應(yīng)用前景。課題主要研究方法與結(jié)果如下： 1.多西他賽pH敏感脂質(zhì)體的研究 采用溶解-超速離心法將游離藥物與載藥脂質(zhì)體分離,建立了高效液相法測定脂質(zhì)體中多西他賽的含量及包封率。以磷脂酰乙醇胺(PE)、膽固醇(CHOL)作為主要載體材料,琥珀酸膽固醇單酯作為酸敏感材料,以多西他賽作為模型藥物。以包封率作為主要考察指標,考察了乙醚注入法、薄膜分散法、凍融法三種制備方法,最終選擇薄膜制備法作為脂質(zhì)體的制備方法。然后單因素考察了水化溫度、水化時間、藥脂比、膽固醇的量、琥珀酸膽固醇單酯(CHEMS)的量、水化轉(zhuǎn)速、旋蒸溫度因素對包封率的影響,在此基礎(chǔ)上,采用正交設(shè)計對處方進行優(yōu)化,選用藥脂比、CHEMS的量、水化時間、水化溫度作進行進一步考察,得到多西他賽pH敏感脂質(zhì)體的最優(yōu)處方與最佳制備工藝：PE35mg, DTX6mg, CHOL15mg, CHEMS15mg,水化溫度為60℃,水化時間1.5h,水化轉(zhuǎn)速為800rpm,旋蒸溫度為40℃,包封率為86.40%,載藥量為7.31%。 在最優(yōu)處方的基礎(chǔ)上,以乳糖作為凍干保護劑,采用冷凍干燥法制備凍干制劑。得到的脂質(zhì)體凍干粉末外觀均勻疏松,具有良好的再分散性。透射電鏡下觀察制備的多西他賽pH敏感脂質(zhì)體呈類球狀,外觀圓整,邊緣清晰。動態(tài)光散射儀測得多西他賽pH脂質(zhì)體粒徑為203.32±3.2nm,多分散系數(shù)PDI為0.189±0.05,Zeta電勢為-31.17±2.20mV。由穩(wěn)定性試驗得出,所制備的脂質(zhì)體性質(zhì)較為穩(wěn)定,符合制劑制備的要求。 2.RGD修飾的多西他賽pH敏感脂質(zhì)體的研究 采用多肽的固相合成將三肽RGD連接在CHEMS上,合成RGD-CHEMS,將生成的產(chǎn)物與PE、CHOL以適當(dāng)?shù)谋壤苽銻GD修飾的多西他賽pH敏感脂質(zhì)體(DTX/RGD-PLPS)。透射顯微鏡下觀察所制備的脂質(zhì)體呈類球狀,且外觀圓整無粘連。動態(tài)光散射儀測得的粒徑為221.12±1.7nm,PDI為0.194±0.07,Zeta電勢為-30.24±2.3mV。 以多帕菲(?)作為對照,研究DTX-PLPS、DTX/RGD-PLPS在不同pH值(pH7.4、6.0、5.0、4.0)的含有0.5%吐溫-80的磷酸鹽緩沖液中的釋放特性。結(jié)果顯示與多帕菲(?)相比,藥物包載于脂質(zhì)體中后,其體外釋放時間明顯延長,且載藥脂質(zhì)體在酸性環(huán)境中的釋放較生理環(huán)境pH7.4快,顯示了一定的pH敏感性。3.載藥脂質(zhì)體的體外抗腫瘤評價 本實驗采用MTT法研究了多西他賽溶液、DTX-PLPS. DTX/RGD-PLPS對人乳腺癌細胞(MCF-7)、人肺癌細胞(A549)及人肝癌細胞(HepG2)的細胞毒性作用。結(jié)果顯示,脂質(zhì)體材料對三種腫瘤細胞的存活率并無影響。相較于多西他賽溶液而言,兩種載藥脂質(zhì)體制劑的體外抗腫瘤活性明顯增強,抗腫瘤活性的強弱分別為DTX/RGD-PLPSDTX-PLPSDTX溶液,其半數(shù)抑制濃度IC50分別為：MCF-7：2.02±0.08、3.79±0.17、8.57±0.51μg/mL;A549：2.03±0.11、2.38±0.42、6.39±3.92μg/mL; HepG2:1.65±0.05、3.12±0.15、5.04±0.62μg/mL。細胞攝取實驗結(jié)果表明,兩種脂質(zhì)體制劑在細胞內(nèi)的攝取能力均強于游離的香豆素-6溶液,其中RGD修飾的脂質(zhì)體在三種細胞中的蓄積程度明顯高于未修飾組。因此我們得出脂質(zhì)體具有較好的細胞相容性,能夠?qū)⑺幬镉行У膫鬏斶M入細胞內(nèi),且靶向因子RGD修飾的脂質(zhì)體具有較好的腫瘤靶向性,有望實現(xiàn)腫瘤靶向治療高效低毒的目的。 4.載藥脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的體內(nèi)藥動學(xué)研究 本實驗考察了兔子耳緣靜脈注射兩種脂質(zhì)體制劑與多帕菲(?)后藥物在體內(nèi)的藥動學(xué)特性。結(jié)果顯示,與多帕菲(?)相比,兩種脂質(zhì)體制劑在體內(nèi)作用時間均顯著延長。DAS2.0藥物動力學(xué)軟件分析的結(jié)果顯示,三種制劑在兔子體內(nèi)均符合二室模型,且兩種脂質(zhì)體制劑DTX-PLPS、DTX/RGD-PLPS的AUC值(19.51、16.31ug/L·h)均大于多帕菲(?)的AUC值(7.398μg/L·h)。說明制備的兩種脂質(zhì)體制劑具有較好的緩釋作用并能顯著能加藥物的治療效果。 綜上所述,本課題制備的脂質(zhì)體包封率較高,提高了多西他賽的溶解度,且制備工藝簡單,重現(xiàn)性及穩(wěn)定性較好。并兼具物理化學(xué)靶向與主動靶向作用,能夠靶向腫瘤細胞,顯著提高抑瘤效果并降低了毒副作用。因此,本課題所制備的脂質(zhì)體具有良好的腫瘤靶向性,是具有一定開發(fā)前景的癌癥治療制劑。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R944

【參考文獻】

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1 趙志強;李翔;李曉;鞠倩;曲明靜;;25%毒死蜱微囊懸浮劑不同施藥方法防治花生田蠐螬的效果[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年11期

2 馬玉飛;于俊峰;周偉;沈華;胡偉青;尹端l，

本文編號：1492538