本文關(guān)鍵詞： 膠束 紫杉醇 阿霉素 聯(lián)合化療 氧化還原敏感 前藥　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：癌癥目前仍是影響人類健康的主要疾病之一,可用于全身治療的化療雖然對不能用于局部治療的腫瘤和轉(zhuǎn)移性的腫瘤具有較好的治療效果,但是藥物在體內(nèi)的非靶向分布仍然導(dǎo)致了較低的生物利用度和嚴(yán)重的毒副作用。而且腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的發(fā)展進(jìn)一步限制了單一藥物的治療效果。為了增加腫瘤的治療效果,降低腫瘤耐藥性的風(fēng)險,同時減少對正常組織的損傷,臨床上多采用聯(lián)合給藥治療方式。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是一類具有紫杉烷結(jié)構(gòu)的廣譜抗癌藥,能促進(jìn)微管的形成并抑制微管的解聚,從而抑制腫瘤細(xì)胞的分裂,造成腫瘤細(xì)胞的死亡。阿霉素(Doxorubicin,DOX)是蒽環(huán)類抗癌藥,通過與DNA作用,破壞DNA的結(jié)構(gòu),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的死亡。紫杉醇主要是使細(xì)胞中止在G2/M期,阿霉素則是細(xì)胞周期非特異性藥物,二者作用機(jī)制不同,細(xì)胞作用周期不同,因此可用于腫瘤的聯(lián)合化療。研究結(jié)果表明,PTX和DOX聯(lián)合化療治療乳腺癌的效果要顯著高于單一藥物治療。但是臨床上簡單地將兩種藥物聯(lián)合使用并不能改變傳統(tǒng)化療藥物的非特異性分布,PTX和DOX的聯(lián)合用藥同樣也伴隨著劑量依賴性的神經(jīng)、心臟毒性和中性粒細(xì)胞減少。臨床藥代動力學(xué)實驗也顯示了 PTX和DOX具有不同的血漿分布。如何負(fù)載兩種具有不同藥代動力學(xué)和組織分布特性的藥物以最佳的用藥比例進(jìn)入腫瘤組織仍是研究者們面臨的困難和挑戰(zhàn)。本實驗選擇了生物相容性良好的聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)為載體材料,合成了還原響應(yīng)性的紫杉醇和阿霉素前藥,使其在水中自組裝形成共載藥膠束,實現(xiàn)紫杉醇和阿霉素兩種藥物的共遞送。本課題的研究主要包括兩部分內(nèi)容:(1)TPGS-S-S-DOX和TPGS-S-S-PTX共載藥膠束的制備與理化性質(zhì)考察;(2)TPGS-S-S-DOX和TPGS-S-S-PTX共載藥膠束的體外和體內(nèi)評價。主要的研究方法與結(jié)果如下:1.TPGS-S-S-DOX和TPGS-S-S-PTX共載藥膠束的制備與理化性質(zhì)考察首先將含二硫鍵的小分子化合物3,3'-二硫代二丙酸(DTDP)脫水生成3,3'-二硫代二丙酸酐(DTDPA),增加與羥基的反應(yīng)活性。然后DTDPA與TPGS通過酯化反應(yīng)生成具有二硫鍵的羧基化的TPGS-S-S-COOH。最后紫杉醇和阿霉素分別通過酯鍵和酰胺鍵與TPGS-S-S-COOH相連,合成還原響應(yīng)性的結(jié)合物TPGS-S-S-PTX和TPGS-S-S-DOX。通過熔點測定、氫譜(1H-NMR)、紅外圖譜(FT-IR)、高效液相色譜(HPLC)等對中間產(chǎn)物及終產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)認(rèn)證。通過核磁氫譜計算紫杉醇前藥中藥物的含量約為20%,用紫外分光光度法測得阿霉素前藥中藥物的含量約為24%。TPGS-S-S-DOX和TPGS-S-S-PTX在水溶液中可自組裝形成膠束�？疾炝斯草d藥膠束的理化特征,透射電鏡觀察制備的膠束為球形,馬爾文激光粒度分析儀測量膠束的粒徑為98.5±1.18nm,Zeta電位為-9.89±0.76mV。2.TPGS-S-S-DOX和TPGS-S-S-PTX共載藥膠束的體外和體內(nèi)評價采用動態(tài)膜透析的方法對共載藥膠束的體外釋藥情況進(jìn)行了考察。結(jié)果顯示,在不含D,L-二硫蘇糖醇(DTT)的釋放介質(zhì)中,紫杉醇和阿霉素釋放緩慢,而加入還原性物質(zhì)DTT后,紫杉醇和阿霉素的釋放速率和釋放量均增加,表現(xiàn)出氧化還原敏感性的釋藥行為。以B16黑色素瘤細(xì)胞為模型,通過MTT的方法考察了 PTX、紫杉醇前藥膠束M(PTX)、DOX和阿霉素前藥膠束M(DOX)的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示PTX、M(PTX)、DOX和M(DOX)均表現(xiàn)出時間依賴性和劑量依賴性的細(xì)胞毒性。分別考察了不同比例的阿霉素/紫杉醇對B16細(xì)胞的細(xì)胞毒性,結(jié)果表明在共載藥膠束中,阿霉素和紫杉醇的質(zhì)量比為1:1和4:1時細(xì)胞毒性效果較好,具有協(xié)同作用。共載藥膠束的細(xì)胞攝取和細(xì)胞定性凋亡情況用熒光顯微鏡考察,結(jié)果顯示膠束可以有效地進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞對膠束的攝取隨著時間的延長而增加,共載藥膠束與B16細(xì)胞作用之后,抑制了 B16細(xì)胞的增殖,細(xì)胞數(shù)目明顯減少,可觀察到細(xì)胞核固縮、破裂。皮下接種B16細(xì)胞建立荷瘤小鼠模型,以小鼠瘤體積變化和體重變化為指標(biāo)評價了膠束的體內(nèi)抑瘤效果和用藥安全性,并與游離的紫杉醇和阿霉素混合溶液相比較。體內(nèi)藥效學(xué)實驗結(jié)束后對各組小鼠的腫瘤組織及主要臟器進(jìn)行HE染色,觀察膠束組和原料藥組中腫瘤和主要臟器的生理變化。實驗結(jié)果說明,對比于生理鹽水組,原料藥組與膠束組都能有效抑制腫瘤的生長,膠束組的抑瘤效果更好。實驗過程中,原料藥組小鼠出現(xiàn)食欲減退,活動減弱現(xiàn)象,體重逐漸降低,而膠束組的與生理鹽水組小鼠體重變化趨勢相似。HE染色的結(jié)果表明,原料藥組和膠束組腫瘤組織均有多處細(xì)胞壞死,但膠束組細(xì)胞壞死面積較大,且對正常組織沒有產(chǎn)生明顯的病變。
[Abstract]:In order to improve the therapeutic effect of tumor cells and to reduce the risk of tumor cell death . The cell uptake and cell apoptosis of the drug micelles were investigated by fluorescence microscope . The results showed that the micelle could effectively enter the cells . After the action of the micelle and B16 cells , the growth of tumor and the physiological changes of the main organs were observed .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R965

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本文編號：1456090