本文關(guān)鍵詞： 維生素D 熒光素酶報告基因 活性測定 藥物篩選 體外檢測模型　出處：《藥物分析雜志》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:為維生素D生物活性或類維生素D活性的藥物篩選建立體外檢測模型。方法:利用分子生物學技術(shù)構(gòu)建了含有熒光素酶報告基因的載體。PCR擴增CYP24A1啟動子上下游區(qū)域,并插入到含有紅色熒光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和熒光素酶報告基因(luciferase reporter gene)的p RP-RFP-luciferase載體中。經(jīng)PCR、雙酶切和測序鑒定后,轉(zhuǎn)染至Hela細胞,以RFP的表達反映轉(zhuǎn)染效率,熒光素酶的活性水平反映維生素D藥物活性的強弱。結(jié)果:經(jīng)鑒定,構(gòu)建的熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染Hela細胞后有紅色熒光表達,熒光素酶報告基因檢測可有效反映1,25(OH)_2D_3生物活性。結(jié)論:在體外細胞水平上,利用熒光素酶報告基因檢測維生素D生物活性的方法簡單可行,為后續(xù)篩選和研發(fā)具有維生素D活性的藥物奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to establish an in vitro assay model for the screening of vitamin D bioactivity or vitamin D like activity. A vector containing luciferase reporter gene was constructed by molecular biology to amplify the upstream and downstream region of CYP24A1 promoter. And inserted into red fluorescent protein containing red fluorescent protein. In p RP-RFP-luciferase vector of luciferase reporter gene and luciferase reporter gene. After double enzyme digestion and sequencing, transfected into Hela cells, the transfection efficiency was reflected by the expression of RFP, and the activity level of luciferase reflected the strength of vitamin D drug activity. The luciferase reporter gene vector was transfected into Hela cells and expressed in red. The detection of luciferase reporter gene can effectively reflect 1. Conclusion: the method of detecting vitamin D bioactivity by luciferase reporter gene in vitro is simple and feasible. It lays the foundation for screening and developing drug with vitamin D activity.
【作者單位】： 陜西理工大學維生素D生理與應(yīng)用研究所;
【基金】：漢中市科技局項目(No.2014ZKC47-07) 陜西理工學院博士啟動項目(SLGQD13(2)-22) 陜西省科技創(chuàng)新團隊項目(2012KCT-29)
【分類號】：R927.1
【正文快照】： 在藥物篩選領(lǐng)域,報告基因技術(shù)已經(jīng)成為一種重要的研究工具,其利用藥物處理細胞后報告基因的表達情況來反映藥物的活性[1]。報告基因技術(shù)是把報告基因的編碼序列與特定的順式調(diào)控序列連接形成重組基因,在調(diào)控序列控制下進行表達,從而可直觀地反應(yīng)細胞內(nèi)與基因表達有關(guān)的信號級

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1451598