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維拉帕米通過阻斷鈣離子內(nèi)流抑制血管平滑肌細胞鈣化研究

發(fā)布時間:2018-01-19 08:52

  本文關(guān)鍵詞: 維拉帕米 肌細胞 平滑肌 血管鈣化 鈣通道 出處:《中國全科醫(yī)學(xué)》2015年27期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的探討維拉帕米抑制高磷誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)鈣化的作用及可能機制。方法2014年12月—2015年6月選取5~8周齡清潔級健康雄性SD大鼠6只,體外分離培養(yǎng)大鼠VSMCs,采用免疫組化法鑒定。將對數(shù)期VSMCs隨機分為正常對照組〔含10%胎牛血清(FBS)培養(yǎng)基〕、高磷組(高磷培養(yǎng)基,含10 mml/Lβ-甘油磷酸)、維拉帕米干預(yù)組(在高磷培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入維拉帕米至濃度為20 mmol/L)。細胞接受2、4、6 d干預(yù)后,檢測VSMCs內(nèi)鈣離子水平,采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測VSMCs內(nèi)目的基因(smad1、runx2mRNA)表達水平。細胞接受14 d干預(yù)后進行鈣化檢測,包括鈣水平測定和茜素紅染色情況。結(jié)果高磷組、維拉帕米干預(yù)組2、4、6 d后VSMCs內(nèi)鈣離子水平均高于正常對照組(P0.05);維拉帕米干預(yù)組2、4、6 d后VSMCs內(nèi)鈣離子水平均低于高磷組(P0.05)。高磷組、維拉帕米干預(yù)組4、6 d后VSMCs內(nèi)鈣離子水平分別高于2 d后(P0.05);高磷組6 d后VSMCs內(nèi)鈣離子水平高于4 d后(P0.05);維拉帕米干預(yù)組6 d后VSMCs內(nèi)鈣離子水平低于4 d后(P0.05)。高磷組、維拉帕米干預(yù)組2、4、6 d后VSMCs內(nèi)smad1、runx2 mRNA表達水平均高于正常對照組(P0.05);維拉帕米干預(yù)組2、4、6 d后VSMCs內(nèi)smad1、runx2 mRNA表達水平均低于高磷組(P0.05)。高磷組4、6 d后VSMCs內(nèi)smad1、runx2 mRNA表達水平分別高于2 d后,6 d后VSMCs內(nèi)smad1、runx2 mRNA表達水平分別高于4 d后(P0.05);維拉帕米干預(yù)組4 d后VSMCs內(nèi)smad1 mRNA表達水平高于2 d后,runx2 mRNA表達水平低于2 d后,6 d后VSMCs內(nèi)smad1、runx2 mRNA表達水平均高于2、4 d后(P0.05)。高磷組、維拉帕米干預(yù)組VSMCs鈣水平均高于正常對照組(P0.05);維拉帕米干預(yù)組VSMCs鈣水平低于高磷組(P0.05)。高磷組、維拉帕米干預(yù)組橘紅色鈣化結(jié)節(jié)較正常對照組多,維拉帕米干預(yù)組橘紅色鈣化結(jié)節(jié)較高磷組少。結(jié)論維拉帕米在高磷誘導(dǎo)的VSMCs鈣化中起抑制作用,其可能是通過抑制鈣離子內(nèi)流進而抑制smad1表達,進一步抑制runx2表達,進而抑制VSMCs發(fā)生表型轉(zhuǎn)化來實現(xiàn)的。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of verapamil on VSMCs induced by high phosphorus in rat vascular smooth muscle cells (VSMCs). Methods from December 2014 to June 2015, 6 healthy male Sprague-Dawley rats (5 weeks old, 8 weeks old) were selected. Rat VSMC was isolated and cultured in vitro and identified by immunohistochemical method. The logarithmic phase of VSMCs was randomly divided into normal control group (containing 10% fetal bovine serum). High phosphorus group (high phosphorus medium, containing 10 mml/L 尾 -glycerophosphoric acid). In the verapamil intervention group (the concentration of verapamil was 20 mmol / L) on the basis of high phosphorous medium, the calcium level in VSMCs was detected after the cells were treated with 2 渭 m / L for 6 days. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the target gene in VSMCs. The expression level of runx2 mRNA. after 14 days of intervention, the cells were tested for calcification, including calcium level determination and alizarin red staining. Results High phosphorus group, verapamil intervention group 2, 4. After 6 days, the level of calcium in VSMCs was higher than that in control group (P 0.05). The level of calcium in VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in high phosphorus group (P 0.05) and verapamil intervention group (4) after 6 days. After 6 days, the level of calcium in VSMCs was higher than that in P0. 05 after 2 d. The level of calcium in VSMCs of high phosphorus group was higher than that of P0.05 after 4 days. The level of calcium in VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in control group after 4 days. In high phosphorus group and in verapamil intervention group, smad1 was found in VSMCs 6 days after treatment with verapamil. The expression of runx2 mRNA was higher than that of normal control group (P 0.05). In verapamil intervention group, the expression of smad1rx2 mRNA in VSMCs was lower than that in high phosphorus group (P 0.05) and high phosphorus group (4) after 6 days. The expression level of smad1rx2 mRNA in VSMCs was higher than that in VSMCs 6 days after 6 days. The expression of runx2 mRNA was higher than that of P0.05 after 4 days. The expression level of smad1 mRNA in VSMCs of verapamil intervention group was higher than that of runx2 mRNA expression after 2 days. After 6 days, the expression level of smad1rx2 mRNA in VSMCs was higher than that in P0.05 + P0.05 group. The level of VSMCs calcium in verapamil intervention group was higher than that in normal control group (P 0.05). The calcium level of VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in high phosphorus group (P 0.05). The orange calcified nodules in verapamil intervention group were higher than those in normal control group. Verapamil intervention group had fewer orange calcified nodules than high phosphorus group. Conclusion verapamil plays an inhibitory role in VSMCs calcification induced by high phosphorus. It may be achieved by inhibiting the influx of calcium ions, thus inhibiting the expression of smad1, further inhibiting the expression of runx2, and then inhibiting the phenotypic transformation of VSMCs.
【作者單位】: 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腎內(nèi)科;
【基金】:河北省自然科學(xué)基金資助項目(項目編號:H2012206157)
【分類號】:R965
【正文快照】: Inhibition of the Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells by Verapamil Though the Blocking of the Inward Flow ofCalcium Ion LI Tong-miao,XU Jin-sheng,FENG Yu,et al.Department of Nephrology,the Forth Hospital of HebeiMedical University,Shijiazhuang

【共引文獻】

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