本文關(guān)鍵詞：三對(duì)苯丙素類同分異構(gòu)體對(duì)HepG2細(xì)胞系代謝同工酶CYP3A4、1A1酶表達(dá)的研究　出處：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：化合物結(jié)構(gòu)是決定藥效發(fā)揮的最本質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)選取三對(duì)苯丙素類同分異構(gòu)體補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、阿魏酸和異阿魏酸，討論其結(jié)構(gòu)變化對(duì)HepG2細(xì)胞系藥物代謝同工酶CYP3A4、1A1調(diào)控的影響，并闡述其相關(guān)機(jī)制，，從而為臨床中草藥的安全合理使用提供理論基礎(chǔ)。 方法： 1.采用MTT比色法測(cè)定六種藥物作用48h后對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響，計(jì)算IC50，篩選有效濃度。 2.采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定六種藥物對(duì)HepG2細(xì)胞周期的影響。 3.通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定經(jīng)六種藥物處理細(xì)胞后HepG2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表達(dá)變化。 4.用免疫熒光法（IF）和蛋白免疫印跡法（WB）定位及定量測(cè)定六種藥物對(duì)HepG2中細(xì)胞CYP3A4蛋白酶表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.給藥48h，六種藥物在七個(gè)濃度（6.25~200μg/mL）作用下對(duì)HepG2細(xì)胞系增殖均有抑制作用，并有明顯的劑量依賴關(guān)系。補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、阿魏酸和異阿魏酸均抑制細(xì)胞增殖于G2-M期，而歐前胡素和異歐前胡素阻止細(xì)胞增殖于G2-M期和S期。 2.六種藥物均是CYP3A4mRNA的抑制劑。異補(bǔ)骨脂素的抑制作用比補(bǔ)骨脂素更強(qiáng)；歐前胡素在高中低三個(gè)濃度時(shí)均為CYP3A4mRNA的弱抑制劑，異歐前胡素的抑制能力明顯強(qiáng)于歐前胡素；異阿魏酸對(duì)CYP3A4mRNA的抑制作用略強(qiáng)于阿魏酸。 3.六種藥物均是CYP1A1mRNA的抑制劑。補(bǔ)骨脂素對(duì)CYP1A1mRNA的抑制略比異補(bǔ)骨脂素強(qiáng)；異歐前胡素在低濃度時(shí)（25、50μg/mL）對(duì)1A1mRNA的抑制作用明顯強(qiáng)于歐前胡素，而在高濃度時(shí)（100μg/mL）兩藥作用程度無(wú)太大區(qū)別；異阿魏酸在高中低三個(gè)濃度時(shí)對(duì)1A1mRNA的抑制作用明顯強(qiáng)于阿魏酸。 4. IF和Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)CYP3A4蛋白主要存在于細(xì)胞漿中，六種藥物作用后的CYP3A4蛋白表達(dá)明顯降低。 結(jié)論: 1.六種藥物均為CYP3A4和CYP1A1酶的抑制劑，在臨床藥物合用時(shí)應(yīng)注意因藥物積蓄毒性而造成的不良反應(yīng)。 2.六種藥物均阻止了細(xì)胞mRNA和蛋白質(zhì)的合成進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞HepG2增殖，且歐前胡素和異歐前胡素同時(shí)減弱了DNA的合成從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。 3.補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、歐前胡素和異歐前胡素此四者同屬呋喃香豆素類化合物，發(fā)現(xiàn)呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)變化是導(dǎo)致此四者對(duì)CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋白差異較大的主要原因；苯環(huán)上的酚羥基異構(gòu)是阿魏酸和異阿魏酸對(duì)CYP3A4和CYP1A1酶具有不同抑制強(qiáng)度的原因。
[Abstract]:Objective: the compound structure is the most essential foundation decided to take effect, this experiment selects three of phenylpropanoid similar isomers of psoralen, isopsoralen, imperatorin, isoimperatorin, ferulic acid and isoferulic acid, discusses its structure changes effect on HepG2 cell line of drug metabolism isoenzyme CYP3A4,1A1 regulation, and discusses the related mechanism, thus providing a theoretical basis for clinical rational use of Chinese herbal medicine.
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本文編號(hào)：1438757