本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍通過(guò)P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移　出處：《貴州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移對(duì)于血管動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展以及斑塊的破裂具有重要意義。二甲雙胍作為一種廣泛應(yīng)用于臨床的降糖藥,據(jù)報(bào)道它能夠抑制細(xì)胞的增殖和遷移。本文通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探尋二甲雙胍對(duì)原代人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響,并闡明其分子機(jī)制。方法:選取2組不同代數(shù)的原代人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(第三代和第七代),通過(guò)β半乳糖苷酶染色、細(xì)胞計(jì)數(shù)、CCK-8、細(xì)胞周期和細(xì)胞Transwell檢測(cè)這兩組不同代數(shù)細(xì)胞的衰老、增殖和遷移能力;通過(guò)western blot檢測(cè)這兩組細(xì)胞中P53、IFI16、AMPK和P-AMPK的蛋白表達(dá)水平;通過(guò)細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)這兩組細(xì)胞中P53和IFI16的內(nèi)源性表達(dá)水平。分別用不同濃度的二甲雙胍(0,2,5,10 mmol/l)刺激第三代的平滑肌細(xì)胞24小時(shí),通過(guò)RT-PCR檢測(cè)四組細(xì)胞中P53和IFI16的mRNA水平,通過(guò)western blot檢測(cè)四組細(xì)胞中P53、P-P53(Ser-15)、IFI16、AMPK和P-AMPK的蛋白表達(dá)水平;并通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、CCK-8、細(xì)胞周期和細(xì)胞Transwell檢測(cè)這四組細(xì)胞的增殖和遷移能力。取第三代平滑肌細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照小干擾RNA(control siRNA)和P53小干擾RNA(P53 siRNA),設(shè)未處理組(Untreated group),陰性對(duì)照組(Control siRNA group)和P53小干擾組(P53 siRNA group),通過(guò)RT-PCR和western blot檢測(cè)P53,IFI16和AMPK的表達(dá)水平;在P53小干擾RNA轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中加入二甲雙胍(10mmol/l)刺激24小時(shí),通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、CCK-8、細(xì)胞周期和細(xì)胞Transwell再次評(píng)估二甲雙胍對(duì)P53干擾后平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響。同樣取第三代平滑肌細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照小干擾RNA(control siRNA)和IFI16小干擾RNA(IFI16 siRNA),設(shè)未處理組(Untreated group),陰性對(duì)照組(Control siRNA group)和IFI16小干擾組(IFI16 siRNA group),通過(guò)RT-PCR和western blot檢測(cè)P53,IFI16和AMPK的表達(dá)水平;在IFI16小干擾RNA轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中加入二甲雙胍(10 mmol/l)刺激24小時(shí),通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、CCK-8、細(xì)胞周期和細(xì)胞Transwell再次評(píng)估二甲雙胍對(duì)IFI16干擾后平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響。在分別轉(zhuǎn)染P53小干擾RNA和IFI16小干擾RNA的細(xì)胞中加入二甲雙胍(10mmol/l)刺激24小時(shí),通過(guò)western blot檢測(cè)P53,P-P53(Ser-15),IFI16,AMPK和P-AMPK的表達(dá)水平。結(jié)果:衰老的平滑肌細(xì)胞(第七代)呈現(xiàn)增殖和遷移能力的減弱,其中P53,IFI16,AMPK和P-AMPK的蛋白表達(dá)水平明顯增加。二甲雙胍通過(guò)激活P53,IFI16和AMPK的表達(dá)抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。P53和IFI16干擾后能引起AMPK表達(dá)的降低,同時(shí)能明顯地逆轉(zhuǎn)二甲雙胍在平滑肌細(xì)胞中的抑制作用。在P53和IFI16干擾的平滑肌細(xì)胞中,二甲雙胍并不能激活A(yù)MPK的表達(dá)。結(jié)論:二甲雙胍通過(guò)P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移。這些研究結(jié)果提示二甲雙胍具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的潛力。
[Abstract]:The effects of metformin on proliferation and migration of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by RT - PCR and Western blot . The effects of metformin on proliferation and migration of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by Western blot . The expressions of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by Western blot . The results showed that metformin did not activate the expression of P53 , P - P53 ( Ser - 15 ) , IFI16 , AMPK and P - AMPK .

【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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2 Elisabeth Uitz;Babak Bahadori;Mark F McCarty;Mohammed H Moghadasian;;Practical strategies for modulating foam cell formation and behavior[J];World Journal of Clinical Cases;2014年10期

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本文編號(hào)：1419701