本文關(guān)鍵詞：重組人IFNα-2b融合表達(dá)及純化工藝研究　出處：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2016年23期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： IFNα-b 表達(dá) 純化 P-TrxA-SUMO載體 層析

【摘要】：為了利用多分子伴侶表達(dá)載體在大腸埃希氏菌中融合表達(dá)人干擾素(IFNα)-2b,并進(jìn)行IFNα-2b純化工藝研究,試驗(yàn)采用人工設(shè)計(jì)并合成Smt3-IFNα-2b克隆至自行構(gòu)建的P32-TrxA載體中,將重組表達(dá)質(zhì)粒P32-TrxA-Smt3-IFNα-2b轉(zhuǎn)化至大腸埃希氏菌(E.coil)BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、SDS-PAGE分析,在此基礎(chǔ)上利用金屬螯合層析、SUMO蛋白酶酶切、陰離子交換層析以及凝膠層析建立了IFNα-2b的純化工藝。結(jié)果表明:重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定及測(cè)序證明構(gòu)建正確;融合蛋白分子質(zhì)量約為40 ku,主要以可溶形式表達(dá),表達(dá)量占菌體總蛋白的30%以上;純化的IFNα-2b分子質(zhì)量約為17 ku,蛋白純度達(dá)到95%以上,利用細(xì)胞病變抑制法測(cè)得干擾素的效價(jià)為1.0×10~8IU/mg。說明成功在大腸埃希氏菌中表達(dá)并經(jīng)過簡易工藝純化了重組蛋白IFNα-2b。
[Abstract]:In order to use the expression of molecular chaperones vector in Escherichia coli fusion expression of human interferon alpha (IFN alpha) -2b, and purification of IFN alpha -2b test with artificial design and synthesis of Smt3-IFN alpha -2b was cloned into P32-TrxA vector to construct the recombinant expression plasmid P32-TrxA-Smt3-IFN, alpha -2b was transformed into Escherichia coli (E.coil) BL21 (DE3), the expression of SDS-PAGE induced by IPTG analysis, on the basis of the use of metal chelating chromatography, SUMO protease digestion, anion exchange chromatography and gel chromatography to establish the purification process of IFN alpha -2b. The results showed that the recombinant plasmid was verified by enzyme digestion and sequencing showed that the fusion protein was constructed correctly; molecular mass of about 40 Ku, mainly expressed in soluble form, the expression of the total protein of the bacteria accounted for more than 30%; the IFN alpha -2b molecular weight of the purified protein was about 17 Ku, the purity reached more than 95%, using cytopathic inhibition test The potency of interferon was 1 * 10~8IU/mg. indicating that the recombinant protein IFN alpha -2b. was successfully expressed in Escherichia coli and purified by a simple process.

【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;
【分類號(hào)】：R94;TQ920.1
【正文快照】： 人干擾素(IFN)α-2b是由白細(xì)胞產(chǎn)生的Ⅰ型干擾素[1],是一種抗腫瘤、抗病毒并且可以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的廣譜類藥物,其作用是在免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前使細(xì)胞形成抗病毒狀態(tài),并具有抑制病毒增殖、防止病毒擴(kuò)增、使病毒失活的作用,同時(shí)通過誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子發(fā)揮協(xié)同抗病

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本文編號(hào)：1358853