本文關(guān)鍵詞：FA-PEG-hyd-DOX連接物的穩(wěn)定性、藥物動(dòng)力學(xué)及抗腫瘤活性研究

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【摘要】：阿霉素(doxorubicin,DOX)具有抗瘤譜廣、療效確切、價(jià)廉易得等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、膀胱癌等實(shí)體腫瘤的治療。但是DOX存在嚴(yán)重的心臟毒性、骨髓抑制作用以及較高的耐藥性等弊端而限制了它的臨床應(yīng)用。由于大分子腫瘤靶向藥物具有對(duì)腫瘤組織選擇性高、在正常組織中分布少、能有效增加藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間等優(yōu)點(diǎn),成為新藥研發(fā)的熱點(diǎn)。目的:本研究制備了新型DOX大分子腫瘤靶向連接物FA-PEG-hyd-DOX,并對(duì)FA-PEG-hyd-DOX連接物的凍干粉制劑、穩(wěn)定性、體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)進(jìn)行研究,闡明其成藥特性,為FA-PEG-hyd-DOX連接物的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:本研究以葉酸作為腫瘤靶向配體、以聚乙二醇作為大分子藥物載體、以DOX為活性藥物,制備新型DOX大分子腫瘤靶向連接物FA-PEG-hyd-DOX。依據(jù)2010版《中國(guó)藥典》二部附錄XIXC《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》及《ICHQ1-新原料藥和制劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)》,對(duì)DOX、FA-PEG-hyd-DOX連接物及FA-PEG-hyd-DOX連接物凍干粉制劑進(jìn)行穩(wěn)定性考察。采用HPLC-DAD法檢測(cè)DOX、FA-PEG-hyd-DOX連接物及其凍干粉制劑在影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)及長(zhǎng)期試驗(yàn)條件下dox質(zhì)量百分含量的變化,采用x-4顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定熔點(diǎn)變化并同時(shí)考查試驗(yàn)前后外觀性狀變化。采用hplc-dad法研究dox及fa-peg-hyd-dox連接物在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)。通過(guò)對(duì)裸鼠皮下注射hepg2細(xì)胞構(gòu)建腫瘤模型,分別給予0.9%氯化鈉注射液、游離dox(5.0mg/kg)及fa-peg-hyd-dox連接物(含dox2.5mg/kg、5.0mg/kg、10mg/kg)。對(duì)裸鼠體重、腫瘤體積、生存情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。給藥結(jié)束后,采用he染色法觀察荷瘤裸鼠主要器官組織的形態(tài)變化。采用活體成像儀及熒光顯微鏡觀察dox在荷瘤裸鼠腦、心臟、肝臟、脾臟及腫瘤等組織中的分布情況。結(jié)果:1.通過(guò)1hnmr和ir等方法證實(shí)合成的終產(chǎn)物為目標(biāo)產(chǎn)物。2.影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明,dox、fa-peg-hyd-dox連接物的穩(wěn)定性與溫度、濕度、光照密切相關(guān)。dox在高溫、高濕、強(qiáng)光照環(huán)境中放置10天后,dox質(zhì)量百分含量分別為31.95%、66.36%和61.27%,熔點(diǎn)分別為195℃、194℃和194℃。fa-peg-hyd-dox連接物在高溫、高濕、強(qiáng)光照環(huán)境中放置10天后,dox質(zhì)量百分含量分別為2.71%、3.85%和3.14%,熔點(diǎn)范圍分別為169~175℃、170~175℃和170~175℃。fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑在高溫、高濕、強(qiáng)光照環(huán)境中放置10天后,dox質(zhì)量百分含量分別為3.80%、5.76%和4.80%。相同條件下,fa-peg-hyd-dox連接物的穩(wěn)定性高于dox,fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑穩(wěn)定性明顯高于fa-peg-hyd-dox連接物。fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑在置于加速試驗(yàn)條件下6個(gè)月后,以及置于長(zhǎng)期試驗(yàn)條件下12個(gè)月后,其穩(wěn)定性好。上述結(jié)果提示fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑穩(wěn)定性好,fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑適宜于常溫、密封、避光保存。3.尾靜脈注射給予1.75mg/kgdox后,dox在sd大鼠體內(nèi)的半衰期為7.0h,auc為278μg·min·l-1。尾靜脈注射給予1.75mgdox/kg、3.5mgdox/kg、7mgdox/kg的fa-peg-hyd-dox連接物后,dox在sd大鼠體內(nèi)的半衰期分別為36.4h、38.5h和36.7h,auc0-72分別為542μg·min·l-1、1092μg·min·l-1和1781μg·min·l-1。上述結(jié)果表明,與dox組相比較,fa-peg-hyd-dox連接物增加了dox在sd大鼠血液中的循環(huán)時(shí)間,提高了dox在大鼠血液中的循環(huán)總量。4.荷瘤裸鼠給予游離dox后,裸鼠精神狀態(tài)差、消瘦、行動(dòng)遲緩,fa-peg-hyd-dox連接物給藥組裸鼠生存狀態(tài)良好。這在一定程度上反應(yīng)出了游離dox的毒性作用。荷瘤裸鼠開始給藥時(shí),腫瘤體積約為50mm3。通過(guò)給予生理鹽水、5mg/kg游離dox、2.5mgdox/kgfa-peg-hyd-dox連接物、5mgdox/kgfa-peg-hyd-dox連接物以及10mgdox/kgfa-peg-hyd-dox連接物進(jìn)行抗腫瘤治療,到試驗(yàn)結(jié)束時(shí),各組腫瘤體積分別增加了1322%、278%、510%、156%、13%。與dox相比,fa-peg-hyd-dox連接物表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤作用。荷瘤裸鼠生存時(shí)間曲線表明,與游離dox相比,fa-peg-hyd-dox延長(zhǎng)了荷瘤裸鼠生存時(shí)間。荷瘤裸鼠各器官組織的he染色結(jié)果表明,游離dox給予荷瘤裸鼠后,其心臟組織形態(tài)發(fā)生了較大的變化,腫瘤組織有極少量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),腫瘤細(xì)胞壞死較少。fa-peg-hyd-dox連接物給藥后,腦、心、脾、肝、腎、肺等組織的形態(tài)未發(fā)現(xiàn)顯著變化,而腫瘤組織有大量的炎性細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),腫瘤細(xì)胞大量壞死。活體成像結(jié)果表明,荷瘤裸鼠給予游離dox后,在腦、心、肝、脾、肺、腎及腫瘤組織均有dox分布。荷瘤裸鼠給予fa-peg-hyd-dox連接物后,dox在腫瘤組織的蓄積顯著增多,并且給藥24h后,腫瘤組織dox的蓄積量明顯高于12h,同時(shí)dox在正常組織的分布明顯減少。隨著fa-peg-hyd-dox連接物給藥劑量的增加,腫瘤組織dox的蓄積量明顯增多。熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明,荷瘤裸鼠給予游離dox后,dox紅色熒光在荷瘤裸鼠腦、心臟、肝臟、脾臟、肺、腎等器官組織切片中分布較多,在腫瘤組織切片中的分布較少;荷瘤裸鼠給予fa-peg-hyd-dox連接物后,dox紅色熒光在荷瘤裸鼠腦、心臟、肝臟、脾臟、肺、腎等器官組織切片中的分布明顯減少,而在腫瘤組織切片中的分布明顯增多。結(jié)論:fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑質(zhì)地疏松、色澤均勻、成型性好,穩(wěn)定性高。fa-peg-hyd-dox連接物10%甘露醇凍干粉制劑適宜于常溫、密封、避光保存。fa-peg-hyd-dox連接物增加了dox在大鼠血液中的循環(huán)時(shí)間。fa-peg-hyd-dox連接物增加了dox在荷瘤裸鼠腫瘤組織中的蓄積量,減少了dox在荷瘤裸鼠正常器官組織的分布,延長(zhǎng)了荷瘤裸鼠的生存時(shí)間,減輕了dox的全身毒性,提高了DOX的抗腫瘤活性。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943;R96

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1 李勃;FA-PEG-hyd-DOX連接物的穩(wěn)定性、藥物動(dòng)力學(xué)及抗腫瘤活性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1293253