本文關(guān)鍵詞：α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的高效表達(dá)及酶法制備AA-2G條件優(yōu)化

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【摘要】：目的構(gòu)建分泌表達(dá)α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(α-Cyclodextrin Glycosyltransferase,α-CGTase)的重組菌株,并利用該酶液制備AA-2G。方法經(jīng)PCR擴(kuò)增浸麻芽孢桿菌154基因組獲得α-CGTase基因序列,將該基因序列和p ET26b載體分別經(jīng)Nco I、Xho I雙酶切后用T4 DNA連接酶連接,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21。利用發(fā)酵培養(yǎng)基分泌表達(dá)α-CGTase,利用該酶和淀粉糊精、維生素C反應(yīng)制備AA-2G,并進(jìn)行制備條件優(yōu)化。結(jié)果在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了α-CGTase的胞外分泌表達(dá),胞外環(huán)化酶活力達(dá)到120 U/m L,利用該酶的轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)將淀粉糊精、維生素C轉(zhuǎn)化為AA-2G,經(jīng)HPLC檢測(cè)正確。結(jié)論利用自制α-CGTase得到了AA-2G,通過制備條件優(yōu)化AA-2G產(chǎn)量為17.46 g/L,轉(zhuǎn)化率達(dá)到58.2%(mg/mg)。
【作者單位】： 濟(jì)南市第四人民醫(yī)院;山東省藥學(xué)科學(xué)院山東省生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東省多糖類藥物工程實(shí)驗(yàn)室多糖類藥物發(fā)酵與精制國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室;山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展(863)計(jì)劃(2014AA093603) 山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GSF121043) 山東省自主創(chuàng)新成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(2014CGZH1306) 山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2015GSF121003) 濟(jì)南市重大專項(xiàng)(201403009)
【分類號(hào)】：R943
【正文快照】： (1.濟(jì)南市第四人民醫(yī)院,山東濟(jì)南250101;2.山東省藥學(xué)科學(xué)院山東省生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東省多糖類藥物工程實(shí)驗(yàn)室多糖類藥物發(fā)酵與精制國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南250101;3.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司,山東濟(jì)南250101)(1.The NO.4 People'Hospital of Ji'nan City,Ji'nan 2，

本文編號(hào)：1223824