本文關鍵詞：以Neprilysin為靶點的藥物篩選模型的建立及應用

  更多相關文章： NEP 靶點 畢赤酵母 抑制劑 藥物篩選

【摘要】：盡管現(xiàn)在的醫(yī)療診斷和管理水平都有顯著提高,但全球人民的健康和心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)尤其是高血壓和心力衰竭造成的社會經(jīng)濟負擔,仍然是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。研究發(fā)現(xiàn)在心力衰竭動物模型中,腎臟中的Neprilysin(NEP)蛋白含量增加,活性及表達上調(diào)。NEP (EC 3.4.24.11)是中性內(nèi)肽酶,也稱腦啡肽酶,是一種位于細胞膜表面的Ⅱ型含鋅跨膜金屬蛋白酶,主要的生理功能是水解肽鏈氨基端疏水氨基酸殘基。NEP對調(diào)節(jié)血壓的肽類物質(zhì),如利鈉肽(natriuretic peptide, NP),緩激肽(Bradykinin, BK),內(nèi)皮素等具有降解作用,抑制NEP能增加這些血管活性肽的活性,因此NEP成為治療心血管疾病的一個重要靶點。本課題主要目的是通過建立以NEP為靶標的高通量篩選模型,并應用該模型篩選可以作為先導化合物的抑制劑。利用畢赤酵母表達系統(tǒng),構建重組質(zhì)粒pPICZα-A-NEP,表達載體通過與酵母菌X-33基因組染色體發(fā)生同源重組,將外源基因整合于染色體后實現(xiàn)目的蛋白的表達,表達的蛋白通過Ni2+-NTA親和層析進行分離純化,以此得到純度較高的NEP目的蛋白。應用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)檢測蛋白酶活性,優(yōu)化反應條件,建立藥物篩選體系。應用建立的藥物篩選體系篩選了784種化合物和2000種天然產(chǎn)物分段組分,篩選到2種抑制效果較好的化合物,并測定了這2種化合物的ICso值,其中編號為MDCR02的ICso為101.3 μmol/L,編號為MDCR04的ICso為0.494 μmol/L;篩選到8種抑制率大于90%的天然產(chǎn)物分段組分,通過進行梯度稀釋比較抑制效果,最后得到兩種抑制效果相對較好的組分,分別是MDCNCL01000241, MDCNCL01000242, IC50值均在10μg/mL以下。這些先導藥物的發(fā)現(xiàn)有助于針對NEP開發(fā)新藥。
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R91

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳偉;王莉莉;;走在藥物發(fā)現(xiàn)前沿的高內(nèi)涵藥物篩選[J];國外醫(yī)學(藥學分冊);2007年03期

2 涂新明,吳小閑;抗HIV藥物篩選技術概況[J];中國人獸共患病雜志;1992年04期

3 ;“非典”藥物篩選獲初步成果[J];廣東教育;2003年06期

4 周勇,陳國平;基因工程技術與藥物篩選[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2000年06期

5 王玉霞;雙雜交技術與藥物篩選[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;2000年05期

6 呂秋軍;藥物篩選技術的研究進展[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;2003年03期

7 張莉,杜冠華;高內(nèi)涵藥物篩選方法的研究及應用[J];藥學學報;2005年06期

8 潘獻柱 ,王林;基于細胞的藥物篩選[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;2005年01期

9 王小營;;高內(nèi)涵藥物篩選的信息整合[J];國際藥學研究雜志;2008年03期

10 梁菊;陳攀;吳文瀾;尹衛(wèi)平;劉志洪;;熒光共振能量轉(zhuǎn)移新技術及其在藥物篩選中的應用[J];中國藥學雜志;2009年13期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜冠華;;第一次北京國際藥物篩選學術研討論會議紀要[A];第九屆中國神經(jīng)藥理學術會議論文摘要集[C];2000年

2 劉艾林;;淺談計算機輔助藥物篩選策略[A];中國科協(xié)第二十三屆新觀點新學說學術沙龍論文集[C];2008年

3 劉玉榮;李劍勇;楊亞軍;;非生物學藥物篩選方法及其應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2010年學術年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

4 卜平;顧玉蘭;陳潔;;多藥耐藥藥物篩選技術平臺的建立與中醫(yī)中藥[A];腫瘤藥物及腫瘤傳統(tǒng)醫(yī)學治療研究[C];2005年

5 喻昕;鄭t，

本文編號：1208095