本文關(guān)鍵詞：酸敏脂質(zhì)體的制備和體外性質(zhì)研究

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【摘要】：目的:由于腫瘤細(xì)胞外為微酸環(huán)境,而設(shè)計(jì)構(gòu)建一種微酸環(huán)境敏感的納米載體,該載體可實(shí)現(xiàn)核酸類(lèi)藥物si RNA的腫瘤組織水平、細(xì)胞水平甚至細(xì)胞器水平的高效定位遞送。通過(guò)合成DSPE-PEG-p HLIP,達(dá)到對(duì)微酸環(huán)境下腫瘤細(xì)胞膜的靶向定位和協(xié)助目的藥物的內(nèi)涵體逃逸,而精氨酸八聚體帶正電,可提高si RNA的載藥量。本課題中,將精氨酸八聚體和硬脂酸偶合,得到陽(yáng)離子聚合物,SA-R8的多個(gè)位點(diǎn)通過(guò)靜電吸附作用與si RNA形成SA-R8/si RNA復(fù)合物,采用薄膜分散法制備酸敏脂質(zhì)體制劑。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳將陽(yáng)離子型SA-R8/si RNA復(fù)合物制劑的載藥效率進(jìn)行評(píng)價(jià),用馬爾文粒徑儀進(jìn)行納米表征,以人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)為細(xì)胞模型。為了證明該載體材料的p H響應(yīng)特性,用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦掃描儀來(lái)定量測(cè)定分別在p H6.5和p H7.4環(huán)境下的細(xì)胞攝取率。為了探索si RNA的胞內(nèi)分布和定位,用激光共聚焦掃描儀來(lái)監(jiān)測(cè)酸敏脂質(zhì)體,從而對(duì)其體外性質(zhì)進(jìn)行了較為深入的研究和探討。方法:通過(guò)查閱文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn),確定了酸敏型壓縮材料SA-R8的合成方法,室溫條件下,充N(xiāo)2避光攪拌24h,通過(guò)MS對(duì)該合成產(chǎn)物進(jìn)行表征。確定DSPE-PEG-p HLIP導(dǎo)向性脂材的合成方法,室溫下,充N(xiāo)2避光攪拌48h后,對(duì)其進(jìn)行MS表征,考察DMF、DMSO、HBS這3種反應(yīng)溶劑反應(yīng)的剩余巰基量。在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,用薄膜分散法制備脂質(zhì)體,以si RNA為模型藥物,粒徑和瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)的電泳行為為主要考察指標(biāo),從而確定最佳處方工藝,且以制劑外觀和粒徑作為參考指標(biāo),來(lái)考察脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。以人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)為細(xì)胞模型,流式細(xì)胞儀以及激光共聚焦掃描儀來(lái)定量評(píng)價(jià)細(xì)胞攝取率,通過(guò)激光共聚焦掃描儀來(lái)監(jiān)測(cè)酸敏脂質(zhì)體在細(xì)胞中的分布以及定位。結(jié)果:通過(guò)MS分析,合成得到了SA-R8和DSPE-PEG-p HLIP,冷凍干燥后均為白色絮狀固體;DMF、DMSO、HBS這3種反應(yīng)溶劑反應(yīng)24h時(shí)剩余巰基量分別為8.42%、2.81%、5.61%,繼續(xù)反應(yīng),剩余巰基量基本不變;制備所得的酸敏脂質(zhì)體粒徑較均一且能在一定時(shí)間范圍內(nèi)穩(wěn)定存在。瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中,壓縮材料SA-R8能很好的將si RNA進(jìn)行包載。相比于普通脂質(zhì)體,p HLIP修飾的脂質(zhì)體細(xì)胞攝取顯著提高,且壓縮材料SA-R8脂質(zhì)體在p H6.5環(huán)境下的細(xì)胞攝取明顯高于在p H7.4,即具有特殊的p H響應(yīng)性。共聚焦實(shí)驗(yàn)顯示:帶綠色熒光的si RNA分布在細(xì)胞內(nèi)并能很好地定位在細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)論:以si RNA為模型藥物,SA-R8陽(yáng)離子聚合物為si RNA的載體,DSPE-PEG-p HLIP修飾脂質(zhì)體表面。通過(guò)薄膜分散法制得脂質(zhì)體,穩(wěn)定性好,能在一定時(shí)間范圍內(nèi)穩(wěn)定存在。人乳腺癌細(xì)胞MCF-7作為細(xì)胞模型,以p HLIP作為導(dǎo)向性脂材修飾的脂質(zhì)體,在p H6.5環(huán)境時(shí)的細(xì)胞攝取效率顯著高于p H7.4。壓縮材料SA-R8能很好地提高si RNA的載藥量,從而顯著提高si RNA的釋放。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R943

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本文編號(hào)：1180973