本文關(guān)鍵詞：通心絡(luò)聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜滋養(yǎng)血管新生相關(guān)炎癥機(jī)制的影響

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【摘要】：目的:本研究通過采用單側(cè)頸動脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)[16]的方法,建立新西蘭兔動脈粥樣硬化(Atherosclerosis AS)早期模型并進(jìn)行藥物干預(yù),通過觀察新西蘭兔AS早期頸動脈形態(tài)、血脂變化、頸動脈外膜與滋養(yǎng)血管(Vasa Vasorum VV)新生相關(guān)因子和炎癥因子的表達(dá)等,以深入探討“金三角”方案(ATS方案[17])即阿托伐他汀+通心絡(luò)+阿司匹林聯(lián)合應(yīng)用對新西蘭兔AS早期模型及管壁VV新生相關(guān)炎癥機(jī)制的干預(yù)作用,為中西醫(yī)結(jié)合防治AS早期病變提供新思路,開辟新途徑。方法:1“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期模型的干預(yù)作用將90只健康雌雄各半新西蘭白兔適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后,隨機(jī)地分為:對照組;模型組;通心絡(luò)組(TXL);阿托伐他汀組(ATO);阿司匹林組(ASP);“金三角”組(ATS);每組15只,對照組給予普通飼料,模型組及各用藥組動物均實(shí)施單側(cè)頸動脈硅膠管包裹術(shù)復(fù)合高脂飼料喂養(yǎng)。根據(jù)人與動物用藥量體表面積計(jì)算法及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道:臨灌胃時用0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液將通心絡(luò)超微粉、阿托伐他汀和阿司匹林配成相應(yīng)濃度的混懸液,體積均為3ml·Kg-1,其中TXL組以通心絡(luò)超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1灌胃;ATO組予阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1灌胃;ASP組給予阿司匹林混懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃;ATS組給予通心絡(luò)超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1加阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1加阿司匹林混懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃,對照組和模型組給予等體積的0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液灌胃,連續(xù)喂養(yǎng)4周后取材,HE染色后利用光鏡觀察包管處頸動脈病理形態(tài)變化;生化法檢測血清TC、TG、LDL-C水平;彩色微球檢測AS早期頸動脈血流灌注情況。2“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用在成功建立AS早期模型的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討“ATS”方案對頸動脈外膜上與VV新生相關(guān)因子表達(dá)的影響,實(shí)驗(yàn)造模、分組、給藥及取材方法同第一部分。于實(shí)驗(yàn)?zāi)?免疫組化法檢測頸動脈外膜CD34表達(dá)情況;RT-PCR、Western blot檢測頸動脈組織血管生長因子及其受體(VEGF、VEGFR-2)的表達(dá)情況;ELISA法檢測血管外膜內(nèi)皮抑素(Endostatin ES)的表達(dá)水平。3“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜炎癥機(jī)制的干預(yù)作用本部分是在前兩部分實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對ATS方案干預(yù)AS早期頸動脈外膜上與血管新生相關(guān)炎癥因子及與頸動脈外膜VV新生相關(guān)炎癥機(jī)制涉及分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用進(jìn)行更深層次的觀察。實(shí)驗(yàn)造模、分組、給藥及取材方法同第一部分,實(shí)驗(yàn)?zāi)?RT-PCR檢測頸動脈組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、NF-κB的表達(dá)情況;ELISA法測定各組頸動脈包裹段外膜白介素-6(IL-6)表達(dá)水平,免疫組化法檢測血管外膜MCP-1、IL-8、NF-κB表達(dá)情況,Western blot檢頸動脈組織NF-κB的表達(dá)水平。結(jié)果:1“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期模型的干預(yù)作用1.1各組頸動脈形態(tài)觀察1.1.1頸動脈HE染色結(jié)果對照組:內(nèi)皮細(xì)胞完整,胞核扁平,與內(nèi)彈力板貼合緊密。中層平滑肌細(xì)胞排列整齊;模型組:內(nèi)膜層不完整,內(nèi)皮細(xì)胞部分脫落,內(nèi)膜層明顯增厚,可見少量泡沫狀巨噬細(xì)胞形成;各用藥組內(nèi)膜層部分增厚,但較模型組程度減輕,以ATO組、TXL組及ATS組改善明顯。1.2各組血脂變化與對照組比較,模型組血清中TC、TG、LDL-C表達(dá)水平顯著升高(P0.01),除阿司匹林組外,與模型組比較,各用藥組血清TC、TG、LDL-C表達(dá)水平降低(P0.01,P0.05);ATS組與TXL組、ATO組、ASP組比較,血清TC、TG、LDL-C表達(dá)水平降低(P0.01),其余各用藥組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.3彩色微球檢測AS早期微血管灌注情況與對照組比較,模型組頸動脈微血管血流量增加(P0.01);其余各用藥組較模型組頸動脈微血管血流量減少(P0.01);與其他各用藥組比較,ATS組微血管血流量明顯減少(P0.01);ATO組與ASP組比較微血管血流量減少(P0.05),TXL組、ASP組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。2“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用2.1各組頸動脈外膜CD34表達(dá)水平與對照組比較,模型組CD34在頸動脈外膜新生VV處表達(dá)增多;與模型組比較,各用藥組頸動脈外膜上CD34表達(dá)減少。2.2各組頸動脈組織VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)水平與對照組比較,模型組VEGFm RNA、VEGFR-2m RNA表達(dá)明顯升高,(P0.01);與模型組比較,各用藥組VEGFm RNA、VEGFR-2m RNA表達(dá)均明顯降低(P0.01,P0.05);與其他用藥組比較,ATS組VEGFmRNA、VEGFR-2m RNA表達(dá)降低(P0.01),TXL組、ATO組及ASP組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。與對照組比較,模型組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)明顯升高,(P0.01);與模型組比較,各用藥組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.01,P0.05);ATS組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)低于TXL組、ATO組及ASP組(P0.01,P0.05);與ASP組比較,TXL組、ATO組VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.05),TXL組、ATO組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。2.3各組頸動脈外膜組織ES的表達(dá)水平與對照組比較,模型組ES表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組比較,各用藥組ES表達(dá)明顯增多(P0.01);與其他各用藥組比較,ATS組ES表達(dá)增多(P0.01);與ASP組比較,TXL組、ATO組ES表達(dá)增多(P0.01),TXL組、ATO組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。3“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜炎癥機(jī)制的干預(yù)作用3.1各組頸動脈組織MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6的表達(dá)水平與對照組比較,模型組MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表達(dá)明顯升高(P0.01);各用藥組與模型組比較,MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表達(dá)降低(P0.01,P0.05);ATS組與其他用藥組分別比較,MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表達(dá)降低(P0.01);其他各用藥組之間兩兩比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。3.2各組頸動脈外膜MCP-1、IL-8、NF-κB的表達(dá)水平與對照組比較,模型組MCP-1、IL-8、NF-κB在血管外膜VV處表達(dá)增多;與模型組比較,各用藥組頸動脈外膜上MCP-1、IL-8、NF-κB表達(dá)減少。3.3各組頸動脈核NF-κB基因和蛋白的表達(dá)水平與對照組比較,模型組NF-κB基因和蛋白表達(dá)明顯升高(P0.01);與模型組比較,TXL、ATO、ASP、ATS組NF-κB基因和蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01);ATS組NF-κB基因和蛋白表達(dá)均低于其他用藥組(P0.01,P0.05),其余組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P0.05)。結(jié)論:本研究采用單側(cè)頸動脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)建立AS早期模型,同時給予藥物干預(yù),證實(shí)“ATS”方案能夠降脂、減輕AS程度,減少管壁微血管灌注量,降低促血管新生因子CD34、VEGF、VEGFR-2的表達(dá),增加抑血管新生因子內(nèi)皮抑素(ES)表達(dá),從而間接表明該方案能夠減少頸動脈外膜新生VV數(shù)量,延緩AS進(jìn)程,其療效優(yōu)于三藥單用,其機(jī)制與減少M(fèi)CP-1、IL-6、IL-8等血管外膜炎癥因子表達(dá),抑制血管外膜炎癥有關(guān),而對NF-κB信號通路的影響可能是其抑制血管外膜炎癥反應(yīng)的重要上游分子機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：1148922