本文關(guān)鍵詞：CMKLR1配體特異性內(nèi)吞機制及β淀粉樣蛋白對正位激動劑chemerin C9的雙相調(diào)控

  更多相關(guān)文章： β淀粉樣蛋白 CMKLR1 內(nèi)吞 鈣流 ERK磷酸化

【摘要】：趨化因子類似物受體1(CMKLR1,ChemR23)是一類具有七次跨膜結(jié)構(gòu)的G蛋白偶聯(lián)受體,可以與chemerin及其衍生的九肽(C9)結(jié)合發(fā)揮細胞功能。近期有研究發(fā)現(xiàn)淀粉樣蛋白β的1-42位肽段同樣可以與CMKLR1結(jié)合。鑒于CMKLR1的不同配體不存在序列同源性,我們擬通過使用穩(wěn)定表達CMKLR1的細胞系來探究它們作用于CMKLR1的藥理效應(yīng)。Aβ42和C9與CMKLR1結(jié)合后都可以引起受體的內(nèi)吞現(xiàn)象,但是只有Aβ42引起的內(nèi)吞現(xiàn)象依賴網(wǎng)格蛋白包被的內(nèi)吞小泡。同樣Aβ42可以刺激β-arrestin 2上膜而C9無法引起相同的現(xiàn)象。C9刺激CMKLR1可以引起很強的鈣響應(yīng)值而Aβ42即使在很高濃度(微摩爾級)也無法引起鈣流。Aβ42可以調(diào)控C9引起的鈣流現(xiàn)象,Aβ42濃度為100 p M時表現(xiàn)為增強作用,10 nM時表現(xiàn)抑制作用,而在1μM時又反轉(zhuǎn)為增強作用。在鈣流實驗中表現(xiàn)的雙相調(diào)控作用同樣存在于C9引起的ERK磷酸化作用中,但是作用效應(yīng)相反。綜合上述實驗結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)Aβ42和C9對CMKLR1的調(diào)控方式不同,這類調(diào)控很可能是通過對不同信號通路的偏向性激活以及受體構(gòu)象改變來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：β淀粉樣蛋白 CMKLR1 內(nèi)吞 鈣流 ERK磷酸化
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符號說明10-11
• 第一章 緒論11-14
• 1 研究背景11-12
• 2 選題意義和研究內(nèi)容12-14
• 2.1 選題意義12-13
• 2.2 研究內(nèi)容13-14
• 第二章 CMKLR1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建14-31
• 1 材料和儀器14-16
• 1.1 原料與試劑14-15
• 1.2 儀器和設(shè)備15
• 1.3 溶液配制15-16
• 1.4 質(zhì)粒16
• 2 實驗方法16-27
• 2.1 質(zhì)粒構(gòu)建16-21
• 2.2 感受態(tài)細菌制備21-22
• 2.3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、擴增與鑒定22-23
• 2.4 質(zhì)粒抽提23-25
• 2.5 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建25-26
• 2.6 免疫熒光26-27
• 3 實驗結(jié)果27-29
• 3.1 質(zhì)粒CMKLR1- pcDNA3.1+表達的檢驗27-28
• 3.2 293細胞分別穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒CMKLR1-EGFP-pcDNA3.1+和FPR2-EGFP- pcDNA3.1+28-29
• 4 討論29
• 5 小結(jié)29-31
• 第三章 Chemerin C9和Aβ_(42)分別誘導CMKLR1內(nèi)吞31-62
• 1 材料和儀器31-34
• 1.1 原料與試劑31-32
• 1.2 儀器和設(shè)備32-33
• 1.3 溶液配置33-34
• 1.4 質(zhì)粒34
• 1.5 細胞34
• 2 實驗方法34-44
• 2.1 細胞培養(yǎng)與傳代34-35
• 2.2 細胞復蘇與凍存-慢凍快融35-36
• 2.3 瞬時轉(zhuǎn)染36-37
• 2.4 細胞計數(shù)37-38
• 2.5 流式細胞術(shù)38-41
• 2.6 免疫熒光41-42
• 2.7 細胞遷移42-44
• 3 實驗結(jié)果44-60
• 3.1 C9誘導CMKLR1內(nèi)吞44-54
• 3.2 Aβ_(42)誘導CMKLR1受體內(nèi)吞54-60
• 4 討論60-62
• 5 小結(jié)62
• 第四章 配體之間的相互調(diào)控作用62-83
• 1 材料和儀器63-65
• 1.1 原料與試劑63-64
• 1.2 儀器和設(shè)備64
• 1.3 溶液配置64-65
• 1.4 質(zhì)粒65
• 1.5 細胞65
• 2 實驗方法65-69
• 2.1 鈣流65-67
• 2.2 蛋白免疫印跡法67-69
• 3 實驗結(jié)果69-81
• 3.1 Aβ_(42)對C9刺激CMKLR1所產(chǎn)生鈣流的調(diào)控作用69-73
• 3.2 C15對C9刺激CMKLR1所產(chǎn)生鈣流的調(diào)控作用73-75
• 3.3 Aβ_(42)對WKYMVm刺激FPR2所產(chǎn)生鈣流的調(diào)控作用75-78
• 3.4 Aβ_(42)對C9刺激CMKLR1所引起ERK磷酸化的調(diào)控作用78-79
• 3.5 Aβ_(42)調(diào)控鈣流與ERK磷酸化變化趨勢的對比79-81
• 4 討論81-82
• 5 小結(jié)82-83
• 第五章 總結(jié)與展望83-85
• 參考文獻85-89
• 致謝89-90
• 攻讀碩士期間的主要研究成果90
• 基金資助項目90-92

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3 黃s釗，

本文編號：1124099