本文關(guān)鍵詞：新型小肽RWR的毒理學和穩(wěn)定性研究

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【摘要】：目的:根據(jù)創(chuàng)新藥物臨床前研究要求,對創(chuàng)新型小肽RWR的毒理學、穩(wěn)定性進行研究,為RWR后期藥代動力學及結(jié)構(gòu)優(yōu)化提供理論和實驗依據(jù)。方法:1.RWR的制備與鑒定采用Fmoc固相合成法制備RWR,反相高效液相色譜法分離純化后,真空冷凍干燥得到RWR,經(jīng)電離噴霧離子化質(zhì)譜(Electrospray ionization mass,ESI-MS)鑒定RWR的純度。2.RWR毒理學研究2.1小鼠急性毒性試驗根據(jù)RWR前期研究(見趙海霞碩士學位論文)藥效學的作用劑量,設(shè)計出毒理學給藥劑量,記錄小鼠的死亡情況,確定其最大耐受劑量(MTD)。2.2 RWR對小鼠骨髓細胞微核生成率的影響分別按照24、96和120 mg/kg對小鼠腹腔注射給藥,取小鼠骨髓細胞制片,計數(shù)骨髓多染紅細胞微核量,檢測RWR對小鼠的致突變性。2.3 RWR對小鼠精子畸變率的影響按照上述給藥劑量對小鼠腹腔注射給藥,取小鼠附睪制片,在顯微鏡下計數(shù)畸形精子,檢測RWR對生殖細胞的遺傳毒性作用。2.4慢性毒性試驗分別按照4.5、18.8和75.0 mg/kg腹腔注射給藥,檢測RWR對大鼠體質(zhì)量、食物利用率、主要臟器系數(shù)、血生化等各項指標及肺、肝、脾、腎、心臟組織的影響,觀察大鼠對RWR的毒性反應(yīng)及其程度,提供毒性反應(yīng)靶器官,確定無毒反應(yīng)劑量。3.RWR穩(wěn)定性實驗研究利用LC-MS/MS法測定RWR的50%甲醇溶液樣本、采用EDTA抗凝的SD大鼠血漿樣本以及加入不同穩(wěn)定劑后采用EDTA抗凝的SD大鼠血漿樣本,檢測RWR配制初和配制后冰上放置4h后的藥量。獲得能夠使RWR在血漿當中穩(wěn)定存在的化學環(huán)境,為后續(xù)的藥代動力學實驗做準備。4.RWR衍生物的設(shè)計及穩(wěn)定性研究在RWR氨基端融合ω-氨基辛酸,設(shè)計合成更為穩(wěn)定的RWR衍生物,初步藥效學證明其活性與RWR相當,利用上述方法檢測其在甲醇和血漿中的穩(wěn)定性,這為設(shè)計合成和開發(fā)更穩(wěn)定的抗栓多肽類藥物提供技術(shù)思路。結(jié)果:1.利用固相合成方法合成了1g RWR,其純度可達到99.006%,能夠滿足后續(xù)試驗用藥量。2.急性毒性試驗最大耐受劑量大于120 mg/kg;隨著RWR濃度的增加;小鼠骨髓細胞微核生成率、精子畸變率沒有顯著性差異;SD大鼠體重、食物利用率、血液生化指標、臟體比無統(tǒng)計學差異,臟器組織形態(tài)學無明顯變化。3.經(jīng)檢測RWR在各種條件下的穩(wěn)定性結(jié)果介于40%~70%之間,以穩(wěn)定性準確度介于85~115%視為樣品穩(wěn)定判定,其在50%甲醇溶液及血漿中穩(wěn)定性較差。4.RWR衍生物在甲醇和血漿中的穩(wěn)定性介于86%~90%之間,說明RWR衍生物能夠在甲醇和血漿樣本中穩(wěn)定存在。結(jié)論:RWR符合藥品安全性毒理學評價標準,表明RWR作為藥用研究有進一步開發(fā)利用的價值。但穩(wěn)定性試驗表明RWR在甲醇溶液及血漿中穩(wěn)定性較差,需要大劑量才能發(fā)揮其生物學活性,在RWR中增加了ω-氨基辛酸后,穩(wěn)定性得到大幅提高,表明RWR衍生物性質(zhì)更穩(wěn)定,為開發(fā)更加穩(wěn)定的抗栓小肽藥物提供了理論依據(jù)和技術(shù)思路。
【關(guān)鍵詞】：RWR RGD 毒理學 穩(wěn)定性
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對照表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 實驗用RWR純化及鑒定16-21
• 1 材料與方法16-18
• 2 實驗結(jié)果18-20
• 2.1 合成所得初產(chǎn)品分離純化后純度檢測18-19
• 2.2 RWR的鑒定19-20
• 3 討論20
• 4 結(jié)論20-21
• 第二部分 RWR的毒理學研究21-38
• 1 急性毒性試驗21-24
• 1.1 材料與方法21-22
• 1.2 實驗結(jié)果22-24
• 2 小鼠骨髓細胞微核生成率試驗24-26
• 2.1 實驗?zāi)康?/span>24
• 2.2 材料與方法24
• 2.3 實驗結(jié)果24-26
• 3 小鼠精子畸形試驗26-28
• 3.1 實驗?zāi)康?/span>26
• 3.2 實驗材料與方法26
• 3.3 實驗結(jié)果26-28
• 4 亞慢性毒性試驗28-35
• 4.1 實驗材料與方法28
• 4.2 實驗結(jié)果28-35
• 5 統(tǒng)計學分析35-36
• 6 討論36-37
• 7 結(jié)論37-38
• 第三部分 RWR穩(wěn)定性研究38-54
• 1 實驗材料與方法38-42
• 2 實驗結(jié)果42-52
• 2.1 RWR甲醇溶液穩(wěn)定性42-43
• 2.2 RWR血漿樣本43
• 2.3 RWR血漿樣本加入穩(wěn)定劑43-49
• 2.4 RWR血漿樣本加入穩(wěn)定劑及冰上操作49-52
• 3 討論52-53
• 4 結(jié)論53-54
• 第四部分 RWR衍生物的設(shè)計及穩(wěn)定性研究54-64
• 1 實驗材料與方法54-58
• 2 實驗結(jié)果58-62
• 2.1 RWR衍生物甲醇溶液穩(wěn)定性58
• 2.2 RWR衍生物血漿樣本穩(wěn)定性58-60
• 2.3 RWR衍生物血漿樣本 13d穩(wěn)定性60-62
• 3 討論62-63
• 4 結(jié)論63-64
• 參考文獻64-67
• 綜述67-77
• 參考文獻74-77
• 致謝77-78
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果78-79
• 個人簡歷79

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本文編號：1113605