本文關(guān)鍵詞：具有抗真菌活性的光親和標(biāo)記探針的設(shè)計(jì)、合成及其功能研究

  更多相關(guān)文章： 協(xié)同 抗真菌 光親和標(biāo)記 靶點(diǎn) 探針

【摘要】：近二十年來,深部真菌感染的發(fā)生率及死亡率呈快速增長趨勢(shì),而目前臨床上常用的抗真菌藥物存在療效有限、毒副作用大、抗菌譜窄和易產(chǎn)生耐藥性等問題,其中真菌的耐藥性成為深部侵襲性真菌感染治療失敗的主要原因。我們前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)小檗堿、連翹酯苷A、芒果苷、黃芩素等天然小分子化合物都具有協(xié)同氟康唑抗耐藥真菌活性,與氟康唑聯(lián)合應(yīng)用,能顯著提高氟康唑的抗耐藥真菌活性,而且他們有相近的體內(nèi)外藥效,相似的藥效基團(tuán),但由于作用機(jī)制不清,作用靶點(diǎn)不明,嚴(yán)重阻礙了以此為基礎(chǔ)的新型抗真菌藥物研究。此外,兩藥協(xié)同抗耐藥真菌過程中,氮唑類抗真菌藥物的分布和外排有待進(jìn)一步的研究與確證。光親和標(biāo)記(PAL)技術(shù)是用于確證、分離和表征新型生物分子及潛在藥物靶點(diǎn)的有效和可靠工具,特別用于未知靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。因此,我們采用PAL-CC-ABPPC(Photoaffinity labeling chck chemistry activity-based protein profiling)技術(shù)將上述化合物做成光親和探針,為后期運(yùn)用生物正交技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)、基因組學(xué)技術(shù)研究藥物靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。在前期針對(duì)小檗堿類探針分子進(jìn)行的靶點(diǎn)探測(cè)的研究基礎(chǔ)上,本課題基于光親和標(biāo)記技術(shù)對(duì)另一類協(xié)同抗真菌劑黃芩素及氮唑類抗真菌藥物進(jìn)行探針化設(shè)計(jì)合成,并對(duì)其應(yīng)用做了初步研究：(1)設(shè)計(jì)合成三氟甲基苯基二氮雜環(huán)丙烯類光親和標(biāo)記基團(tuán)中間體TPD-6,TPD-6a, TPD-6b, TPD-10a, TPD-lOb, TPD-10c, TPD-A, TSL-7,并通過NMR, MS確認(rèn)其結(jié)構(gòu)。(2)以具有協(xié)同氟康唑抗耐藥真菌活性的黃芩素為活性基團(tuán)、三氟甲基苯基二氮雜環(huán)丙烯為光親和標(biāo)記基團(tuán)、芐溴為反應(yīng)基團(tuán)、丙炔基團(tuán)為潛在的報(bào)告基團(tuán),設(shè)計(jì)、合成了探針分子BE-1、BE-2、BE-4、BE-5、BE-6,并通過NMR, MS確認(rèn)其結(jié)構(gòu)。活性測(cè)試結(jié)果表明,BE-2與氟康唑(1μg/ml聯(lián)用,對(duì)耐藥白念珠菌(103)的MIC80為4μg/ml,兩藥合用的FICI值為0.039。BE-5與氟康唑(0.25μg/ml)聯(lián)用的MIC80為8μg/ml,兩藥合用的FICI值為0.065,表明BE-2及BE-5都有較好的協(xié)同氟康唑抗耐藥白念珠菌活性,可作為活性探針用于后續(xù)研究。(3)利用近幾年報(bào)道的帶有活性卡賓及香豆素前體的新型原位標(biāo)簽生成的探針技術(shù),設(shè)計(jì)合成了BE-3,通過NMR、MS確認(rèn)其結(jié)構(gòu),活性測(cè)試結(jié)果與BE-2相當(dāng),其與氟康唑(1 μg/ml)聯(lián)用對(duì)耐藥白念珠菌(103)的MIC80為4μg/ml,兩藥合用的FICI值為0.039,證明其為活性探針。(4)以三氟甲基苯基二氮雜環(huán)丙烯為光親和標(biāo)記基團(tuán),以三氮唑類抗真菌活性類似物為母體,設(shè)計(jì)合成了氮唑類小分子探針FCZ-GB, FCZ-1、FCZ-2、FCZ-3、FCZ-4,并進(jìn)行了體外抗真菌活性測(cè)試,測(cè)得FCZ-GB、FCZ-3、FCZ-4對(duì)白念珠菌(Y0109)的MIC80值分別為：0.25μg/ml、4μg/ml、0.5μg/ml,可作為活性的氮唑類抗真菌藥物探針。為了對(duì)設(shè)計(jì)合成的探針分子的功能進(jìn)行初步的評(píng)估,我們首先將BE-2探針分子與白念珠菌的全蛋白提取液進(jìn)行蛋白結(jié)合的初步研究。SDS-PAGE結(jié)果顯示,蛋白出現(xiàn)特異性條帶,證實(shí)了BE-2具有蛋白結(jié)合功能和與熒光分子成像示蹤動(dòng)能,具備用于后續(xù)靶點(diǎn)研究的可行性。將出現(xiàn)的特異性條帶作初步的質(zhì)譜分析,結(jié)果顯示半胱氨酸或賴氨酸可能為BE-2結(jié)合在靶蛋白上的氨基酸殘基。以上實(shí)驗(yàn)為BE-3及BE-5的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。另外,FCZ-GB用以進(jìn)行結(jié)合靶蛋白的質(zhì)譜分析,對(duì)于FCZ-3及FCZ-4可結(jié)合光親和標(biāo)記及生物正交成像技術(shù)做下一步的靶點(diǎn)信息探測(cè)。本課題設(shè)計(jì)合成了具有協(xié)同氟康唑抗耐藥真菌活性的黃芩素類光親和探針和具有抗真菌活性的氮唑類光親和探針,為兩類化合物的系統(tǒng)抗耐藥機(jī)制和作用靶點(diǎn)研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：協(xié)同 抗真菌 光親和標(biāo)記 靶點(diǎn) 探針
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R914;R91
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 前言12-18
• 1 抗耐藥真菌藥物研究現(xiàn)狀12-15
• 2 基于光親和標(biāo)記的小分子探針技術(shù)15-18
• 第二章 課題設(shè)計(jì)18-23
• 第三章 化學(xué)實(shí)驗(yàn)23-49
• 1 試劑與儀器23
• 1.1 溶劑與原料23
• 1.2 分析檢測(cè)儀器及檢測(cè)條件23
• 2. 光親和標(biāo)記小分子探針的設(shè)計(jì)合成23-49
• 2.1 光親和片段的合成23-30
• 2.1.1 關(guān)鍵中間體TPD-6,TPD-6a,TPD-6b的合成23-25
• 2.1.2 化合物TPD-10a的合成25-26
• 2.1.3 化合物TPD-10b的合成26-27
• 2.1.4 化合物TPD-10c的合成27-28
• 2.1.5 化合物TPD-A的合成28-29
• 2.1.6 化合物TSL-7的合成29-30
• 2.2 目標(biāo)探針分子的合成30-37
• 2.2.1 黃芩素類探針BE-1,BB2的合成31-32
• 2.2.2 黃芩素類探針BE-3的合成32
• 2.2.3 黃芩素類探針BE-4,BE-5的合成32
• 2.2.4 黃芩素類探針BE-6的合成32-33
• 2.2.5 氮唑類探針FCZ-GB的合成33-34
• 2.2.6 氮唑類探針FCZ-1的合成34
• 2.2.7 氮唑類探針FCZ-2的合成34-35
• 2.2.8 氮唑類探針FCZ-3的合成35-36
• 2.2.9 氮唑類探針FCZ-4的合成36-37
• 2.3 藥理實(shí)驗(yàn)中Click反應(yīng)的體外驗(yàn)證37-38
• 2.4 藥理實(shí)驗(yàn)中光解時(shí)間的體外驗(yàn)證38-43
• 2.5 部分化合物的結(jié)構(gòu)與表征43-49
• 第四章 藥理實(shí)驗(yàn)49-58
• 1 探針分子抗耐藥白念珠菌作用活性測(cè)試49-53
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料49-50
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法50-51
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-53
• 2 小分子探針捕獲靶點(diǎn)的初步研究53-58
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料53-54
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法54-55
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-58
• 第五章 小結(jié)與討論58-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 附錄65-80
• 致謝80-82
• 綜述82-102
• 參考文獻(xiàn)96-102
• 作者簡(jiǎn)歷102-103

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭娜;呋喃喹啉類生物堿白鮮堿體外抗真菌活性及作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：1103631