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地拉羅司通過NF-κB信號抑制小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化

發(fā)布時間:2017-10-26 11:10

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【摘要】:目的探討地拉羅司(deferasirox,DFS)體外對小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化的影響及相關(guān)機制。方法體外培養(yǎng)小鼠單核細胞RAW264.7,在核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的作用下誘導(dǎo)分化為破骨細胞,并使用不同濃度DFS(0、5、10、20μmol/L)進行干預(yù),用CCK-8法檢測細胞的增生活性,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法觀察TRAP陽性破骨細胞的形態(tài)并計數(shù),實時定量PCR法檢測細胞轉(zhuǎn)錄因子c-Fos、轉(zhuǎn)錄因子活化T細胞核因子(nuclear factor of activated T cell c1,NFATc-1)和組織蛋白酶K(cathepsin K,CTK)mRNA的表達,雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)報告基因的表達,蛋白免疫印跡(Western blotting)法分別檢測細胞質(zhì)蛋白、核蛋白NF-κB P65的表達。結(jié)果 DFS 0、5、10、20μmol/L組TRAP染色陽性的數(shù)目分別為63.67±3.78、55.33±3.21、34.00±5.00、16.00±4.58,各濃度組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示DFS在實驗濃度圍內(nèi)可減少RANKL誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TRAP染色陽性的數(shù)目;DFS 0、5、10、20μmol/L組c-Fos mRNA表達量分別為1.83±0.11、1.46±0.13、0.88±0.13、0.30±0.09,各濃度組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),NFATc-1 mRNA表達量分別為4.09±0.20、3.21±0.22、2.28±0.23、1.47±0.22,各濃度組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),CTK mRNA表達量分別為3.51±0.08、3.21±0.19、2.55±0.22、1.50±0.19,各濃度組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),以上結(jié)果提示DFS在實驗濃度圍內(nèi)可下調(diào)c-Fos、NFATc-1、CTK mRNA的表達;在RANKL的基礎(chǔ)上加入DFS后NF-κB報告基因的表達量為0.119±0.019,與RANKL組0.202±0.017比較明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示DFS可抑制RAW264.7細胞NF-κB報告基因的表達;在RANKL的基礎(chǔ)上加入DFS后細胞質(zhì)內(nèi)NF-κB P65蛋白表達量為0.56±0.08,與RANKL組0.42±0.09比較明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),細胞核內(nèi)NF-κB P65蛋白表達量為1.49±0.12,與RANKL組1.71±0.08比較明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示DFS可抑制RAW264.7細胞NF-κB P65向細胞核轉(zhuǎn)位。結(jié)論DFS可能通過抑制NF-κB信號活性來抑制小鼠單核RAW264.7細胞向破骨細胞分化。
【作者單位】: 江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院骨科;蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】地拉羅司 RAW.細胞 核轉(zhuǎn)錄因子κB 骨質(zhì)疏松
【基金】:國家自然科學(xué)基金(81572179) 江蘇省臨床醫(yī)學(xué)科技專項(BL2014044) 江蘇省婦幼健康科研項目(F201504) 鎮(zhèn)江市科技計劃項目(SH2014031) 蘇州市科教興衛(wèi)青年科技項目(KJXW2015016)
【分類號】:R965
【正文快照】: 本課題組前期的研究表明,絕經(jīng)后女性體內(nèi)存在鐵蓄積,鐵蓄積主要通過促進破骨細胞的骨吸收導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生,而降鐵療法可輔助治療鐵介導(dǎo)的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥[1-3]。新型鐵螯合劑地拉羅司(deferasirox,DFS)是具有降鐵效率高、臨床使用安全和患者依從性好的特點,適合開發(fā)為治療

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本文編號:1098391

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