本文關(guān)鍵詞：人肝微粒體CYP450酶代謝活性的個(gè)體內(nèi)差異與相關(guān)性

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【摘要】：大部分內(nèi)源性和外源性物質(zhì)均在肝臟中進(jìn)行代謝,肝臟中不同亞型的CYP450酶在上述代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。傳統(tǒng)上CYP450酶的個(gè)體差異均指?jìng)�(gè)體間差異,為藥物代謝、療效和毒性出現(xiàn)個(gè)體差異的主要原因。個(gè)體間差異定義為不同個(gè)體間的同一種CYP450酶代謝活性不同,通常可以用于指導(dǎo)精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)中的個(gè)體化用藥,已被國(guó)內(nèi)外大量研究。個(gè)體內(nèi)差異指同一個(gè)體的不同CYP亞型表現(xiàn)出不同的代謝活性,與個(gè)體間差異相比,個(gè)體內(nèi)差異對(duì)個(gè)體化用藥起著同樣重要的作用。然而,現(xiàn)在關(guān)于CYP450酶的個(gè)體內(nèi)差異卻很少被研究者研究。為了更好的實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥,研究和了解CYP450酶活性的個(gè)體內(nèi)差異非常必要。本研究以105例中國(guó)人的正常肝臟組織為試驗(yàn)對(duì)象,考察了10種主要的CYP亞型(CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4/5)對(duì)特異性底物的相對(duì)代謝活性和個(gè)體內(nèi)差異,同時(shí)分析了不同CYP亞型相對(duì)代謝活性的相關(guān)性,探討了CYP基因多態(tài)性對(duì)個(gè)體內(nèi)差異的影響。期望能夠?yàn)榕R床合理用藥提供理論依據(jù)。方法1人肝標(biāo)本收集收集肝功能正常的肝標(biāo)本105例,年齡范圍20~75歲。肝組織經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確認(rèn)無(wú)HBV或HCV感染,肝功能正常,并且經(jīng)后期組織病理學(xué)檢查證實(shí),屬于正常肝臟組織。本試驗(yàn)方案經(jīng)鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),受試者簽署知情同意書。2人肝微粒體制備和蛋白濃度測(cè)定人肝微粒體的制備采用差速離心法,肝微粒體蛋白含量的測(cè)定采用Bradford法。3人肝微粒體中CYP酶活性的測(cè)定CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4/5的底物分別是非那西汀、香豆素、安非他酮、紫杉醇、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪達(dá)唑侖。摸索各孵育體系中的最佳蛋白濃度和孵育時(shí)間,并最終分別測(cè)定105例正常人肝微粒體中10種CYPs的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)(V_(max)、K_m和CL_(int))。4 10種CYP酶的基因分型采用DNA提取試劑盒從肝組織中提取基因組DNA。10種CYP酶中,本試驗(yàn)檢測(cè)了在中國(guó)人群中發(fā)生頻率大于1%的多態(tài)性位點(diǎn)。5統(tǒng)計(jì)方法采用Graph Pad Prism 5.0軟件計(jì)算酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。以每個(gè)個(gè)體每種CYP酶K_m、V_(max)和CL_(int)的絕對(duì)值除以105例個(gè)體該CYP酶對(duì)應(yīng)參數(shù)的中位數(shù),即得每個(gè)個(gè)體每種CYP酶的相對(duì)代謝活性(Relative K_m、V_(max)和CL_(int))。每個(gè)個(gè)體10種CYP酶的個(gè)體內(nèi)差異采用個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)(ICV)表示,即每個(gè)個(gè)體10種CYP酶的相對(duì)K_m、V_(max)或CL_(int)的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以同一個(gè)體10種CYP酶對(duì)應(yīng)K_m、V_(max)或CL_(int)的平均值。使用SPSS17.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)層次聚類分析來(lái)計(jì)算10種CYP酶的相關(guān)性和相似度。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析10種CYP基因多態(tài)性對(duì)相對(duì)代謝活性的高低。具體采用單因素方差分析(One-way ANOVA)和邦費(fèi)羅尼檢測(cè)(Bonferroni test)方法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05,P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1肝微粒體蛋白濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為C=1.5898A-0.0512(R2=0.9939),105例肝微粒體蛋白濃度中位數(shù)(范圍)為8.39(1.31~11.66)mg·ml~(-1)。2肝微粒體中10種CYP酶對(duì)探針代謝活性的方法學(xué)10種CYP酶的探針底物及人微粒體中的其他雜質(zhì)均不干擾代謝產(chǎn)物的色譜峰,說(shuō)明本研究建立的高效液相色譜法專屬性較高。代謝產(chǎn)物的日內(nèi)及日間變異均小于10%,且回收率均在90%~110%之間,精確性和準(zhǔn)確性均較高。本研究建立的分析方法符合生物樣本的測(cè)定要求。CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4/5孵育體系中的最佳蛋白濃度分別為0.3、0.3、0.5、0.5、0.5、0.5、0.3、0.3、0.2 mg·ml~(-1),最佳孵育時(shí)間分別為30、30、60、120、60、90、20、30、5min。3肝微粒體中10種CYP酶的個(gè)體內(nèi)差異3.1肝微粒體中10種CYP酶活性的個(gè)體內(nèi)差異105例正常中國(guó)人肝微粒體10種CYPs的相對(duì)代謝活性不同,同一個(gè)體的10種CYPs代謝探針?biāo)幬锏南鄬?duì)代謝活性差異較大。105例個(gè)體相對(duì)V_(max)、K_m和CL_(int)的體內(nèi)百分變異系數(shù)分別為44.03%(16.79%?127.42%)、45.88%(18.31%?140.14%)、52.00%(24.20%?134.81%)。3.2肝微粒體中10種CYP酶的相對(duì)代謝活性對(duì)相對(duì)V_(max)、相對(duì)K_m、相對(duì)CL_(int)進(jìn)行排序,其中CYP3A4、CYP2C19和CYP2D6的相對(duì)V_(max)位居前三名,CYP2D6、CYP1A2和CYP2C19的相對(duì)K_m位居前三名,CYP2D6、CYP2B6和CYP3A4的相對(duì)CL_(int)位居前三名。4 10種CYP酶的相關(guān)性對(duì)正常人肝微粒體10種CYPs的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行Pearson相關(guān)分析。發(fā)現(xiàn)CYP2C8與CYP2C9在V_(max)間的相關(guān)性最強(qiáng)(r=0.537,P=3.48E-09)。10種CYPs的K_m間相關(guān)性較低,僅CYP1A2與CYP2C9的K_m間存在較強(qiáng)相關(guān)性(r=0.475,P=3.04E-07)。10種CYPs的CL_(int)間相關(guān)性較V_(max)低。5 10種CYP酶的聚類分析結(jié)果若將10種CYPs的相對(duì)V_(max)聚成兩類,則CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP2B6和CYP3A4/5可聚為一類,剩余的聚為另一類。其中CYP2C8和CYP2C9相對(duì)V_(max)的相關(guān)性最強(qiáng),相似度也最高。10種CYPs的K_m聚類分析結(jié)果顯示CYP1A2、CYP2C9、CYP2B6、CYP2C19、CYP2A6、CYP2C8和CYP2D6可聚為第一類,而CYP2E1和CYP3A4/5聚為第二類。CYP1A2與CYP2C9的相關(guān)性最強(qiáng)、相似度最高。用分層聚類分析的方法對(duì)10種CYPs的相對(duì)CL_(int)進(jìn)行聚類分析,結(jié)果可聚為2類,第一類的成員包括:CYP2C8、CYP2C9、CYP1A2、CYP2B6,第二類的成員包括:CYP2A6、CYP2D6、CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4/5。其中CYP2C8和CYP2C9的相對(duì)CL_(int)表現(xiàn)出最強(qiáng)的相關(guān)性和最高的相似度。6基因多態(tài)性對(duì)CYPs代謝探針?biāo)幬飩�(gè)體內(nèi)差異的影響分析每組例數(shù)大于7例的基因型對(duì)10種CYP酶代謝活性個(gè)體內(nèi)差異的影響,發(fā)現(xiàn)大部分多態(tài)性對(duì)CYP酶代謝活性的個(gè)體內(nèi)差異無(wú)影響。僅發(fā)現(xiàn)CYP2A6*4,CYP2B6 785AG和CYP2D6 100CT顯著影響CYP酶代謝活性的個(gè)體內(nèi)差異。結(jié)論1.10種CYP亞型的代謝活性在同一個(gè)體內(nèi)存在巨大的個(gè)體內(nèi)差異,相對(duì)K_m、V_(max)和CL_(int)的個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)較大。2.同一個(gè)體的CYP亞型之間存在復(fù)雜的相關(guān)關(guān)系,其中CYP2C9和CYP2C8的相對(duì)V_(max)和相對(duì)CL_(int)的相關(guān)性最強(qiáng),相似度最高,CYP2C9和CYP1A2的相對(duì)K_m的相關(guān)性最強(qiáng),相似度最高。3.CYP2A6*4、CYP2B6 785AG和CYP2D6 100CT可以影響10種CYP亞型代謝活性的個(gè)體內(nèi)差異。
【關(guān)鍵詞】：CYP450酶 相對(duì)代謝活性 個(gè)體內(nèi)差異 基因多態(tài)性 人肝微粒體
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 中英文對(duì)照縮略詞14-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-29
• 結(jié)果29-42
• 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 綜述 CYP450酶多態(tài)性在藥物代謝個(gè)體差異中的重要作用48-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在研期間發(fā)表論文68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊子釗;于琴琴;余露山;孫紅穎;曾蘇;;藥物代謝酶的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2013年17期

2 林高通;王晨明;莫菊彩;;CYP3A4基因多態(tài)性對(duì)藥物代謝及其個(gè)體化給藥的影響[J];海峽藥學(xué);2013年04期

3 王蒙;周文佳;肖莉;張全英;;CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)帕羅西汀在中國(guó)健康人藥動(dòng)學(xué)影響[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2012年09期

4 余蓮英;沙衛(wèi)紅;王啟儀;;肝藥酶CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷及質(zhì)子泵抑制劑藥物相互作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2011年04期

5 吳逢波;陳澤蓮;徐s，

本文編號(hào)：1089030