本文關(guān)鍵詞：eEF2K抑制劑的高通量藥物篩選模型的建立及應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 真核生物延伸因子2激酶 多肽鏈延伸 真核生物延伸因子2激酶抑制劑 高通量篩選

【摘要】：真核生物延伸因子2激酶(eukaryotic elongation factor 2 kinase,eEF2K)是由人類基因組eEF2K基因編碼的一個(gè)激酶,是一個(gè)高度保守的激酶,與典型的蛋白激酶在序列上同源性小,它歸屬于一個(gè)名叫"α-激酶"的非典型蛋白激酶小家族。研究顯示,eEF2K在一定的代謝壓力條件下能磷酸化并抑制真核生物延伸因子2(eukaryotic elongation factor 2,eEF2)的功能,進(jìn)而抑制細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成過(guò)程中多肽鏈的延伸,使細(xì)胞中能量和氨基酸的消耗減少,幫助細(xì)胞度過(guò)營(yíng)養(yǎng)缺乏等不利條件。在很多癌細(xì)胞中eEF2K都有很高的活性。同時(shí)eEF2K的活性依賴于鈣離子和鈣調(diào)蛋白,它還有細(xì)胞的保護(hù)作用使之成為癌癥等疾病藥物治療的潛在靶點(diǎn)。本文旨在運(yùn)用高通量藥物篩選的方法來(lái)發(fā)現(xiàn)eEF2K的小分子抑制劑及其藥用前景。在文中我們建立并優(yōu)化了一個(gè)靶向eEF2K小分子抑制劑的高通量篩選方法。我們選用DMSO作為陰性對(duì)照,化合物A484954作為陽(yáng)性對(duì)照,檢測(cè)最終反應(yīng)體系中的冷光值來(lái)反應(yīng)化合物抑制率。如果化合物能抑制反應(yīng)體系中eEF2K的活性,則與陽(yáng)性對(duì)照化合物反應(yīng)孔的冷光值相比,其最終檢測(cè)到的冷光值會(huì)降低。由此計(jì)算我們篩選過(guò)程中化合物的抑制率。最終我們對(duì)56000個(gè)小分子化合物進(jìn)行了大規(guī)模的隨機(jī)篩選,得到了9個(gè)具有劑量依賴性反應(yīng)的活性化合物,選出了5個(gè)IC50值小于50μM的化合物進(jìn)行了體外細(xì)胞水平的功能性驗(yàn)證,進(jìn)一步的研究正在進(jìn)行中。我們的該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)為靶向eEF2K的癌癥等疾病的藥物治療奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：真核生物延伸因子2激酶 多肽鏈延伸 真核生物延伸因子2激酶抑制劑 高通量篩選
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R94
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 第1章 引言6-14
• 1.1 背景概述6-10
• 1.2 國(guó)內(nèi)外本學(xué)科領(lǐng)域的發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢(shì)10-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法的建立14-23
• 2.1 高通量藥物篩選的簡(jiǎn)介14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 2.3 靶向eEF2K的小分子抑制劑高通量篩選方法的建立16-23
• 第3章 高通量篩選23-26
• 3.1 文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)道的eEF2K抑制劑23-25
• 3.2 eEF2K抑制劑的高通量篩選25-26
• 第4章 數(shù)據(jù)分析26-27
• 第5章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-32
• 5.1 高通量篩選結(jié)果27-29
• 5.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-32
• 第6章 結(jié)論與展望32-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 論文綜述 癌癥治療的新靶點(diǎn)——eEF2K39-52
• 參考文獻(xiàn)50-52

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本文編號(hào)：1073218