本文關(guān)鍵詞：FFJ-5的體外抗腫瘤活性及其機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:初步研究大葉茜草素的結(jié)構(gòu)修飾物FFJ-5體外抗腫瘤活性及其對EGFR-AktPKM2信號通路的影響。方法:MTT法檢測大葉茜草素及其結(jié)構(gòu)修飾物FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞生長活力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞周期的影響;Hoechst33342/PI共染高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)分析FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞凋亡的影響;ATP Assay Kit檢測FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞內(nèi)ATP生成量的影響;激光共聚焦顯微鏡檢測BCECF-AM(pH熒光探針)孵育后,FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞內(nèi)pH的影響;Western blot檢測FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞中EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2、PARP、Cleaved PARP、Caspase3和Cleaved Caspase3等蛋白表達(dá)量的影響;激光共聚焦顯微鏡檢測Rh 123(Rhodamine 123)染色后,FFJ-5對A549和HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的影響。結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示:FFJ-5的抗腫瘤活性顯著增強,Mollugin在A549和HepG2細(xì)胞中的IC50值是分別是FFJ-5的7.8倍、5.6倍。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:FFJ-5可呈濃度依賴性的使A549和HepG2細(xì)胞的周期阻滯在G2/M期。(3)Hochst 33342/PI共染結(jié)果顯示:FFJ-5可呈濃度依賴性地誘導(dǎo)A549和HepG2細(xì)胞的凋亡。(4)Western blot結(jié)果顯示:FFJ-5能夠呈濃度依賴性的下調(diào)蛋白EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2的表達(dá)。(5)ATP檢測結(jié)果顯示:FFJ-5呈濃度依賴性地抑制A549和HepG2細(xì)胞內(nèi)ATP的生成。(6)BCECF-AM結(jié)果顯示:FFJ-5可呈濃度依賴性地使A549和HepG2細(xì)胞中pH值降低。(7)羅丹明123染色結(jié)果顯示:FFJ-5可呈濃度依賴性地促使A549和HepG2細(xì)胞線粒體膜電位降低。(8)Western blot結(jié)果顯示:FFJ-5在A549、HepG2細(xì)胞中,可激活Caspase3,使Cleaved-Caspase3表達(dá)升高、導(dǎo)致PARP加速水解,Cleaved-PARP蛋白表達(dá)呈現(xiàn)濃度依賴性地升高。結(jié)論:(1)FFJ-5可顯著抑制A549和HepG2細(xì)胞的生長和增殖,使細(xì)胞阻滯在G2/M期,并呈濃度依賴性。(2)FFJ-5可下調(diào)PKM2蛋白表達(dá),影響腫瘤細(xì)胞的能量代謝和腫瘤細(xì)胞生長的酸性微環(huán)境。(3)FFJ-5可通過EGFR-Akt-PKM2信號通路抑制腫瘤的增殖并誘導(dǎo)腫瘤凋亡。
【關(guān)鍵詞】：FFJ-5 抗腫瘤 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-16
• 第二章 FFJ-5 的體外抗腫瘤活性研究16-30
• 2.1 實驗材料16-19
• 2.1.1 細(xì)胞株16
• 2.1.2 主要儀器16-17
• 2.1.3 藥品和試劑17-18
• 2.1.4 試劑配置方法18-19
• 2.1.5 藥品配置方法19
• 2.2 實驗方法19-21
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19
• 2.2.2 MTT法檢測細(xì)胞生長活力19-20
• 2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期20-21
• 2.2.4 Hoechst33342/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡21
• 2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析21
• 2.3 實驗結(jié)果21-27
• 2.3.1 FFJ-5 抑制腫瘤細(xì)胞生長21-24
• 2.3.2 FFJ-5 阻滯細(xì)胞周期抑制腫瘤細(xì)胞增殖24-25
• 2.3.3 FFJ-5 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡25-27
• 2.4 討論27-28
• 2.5 小結(jié)28-30
• 第三章 FFJ-5 對EGFR-Akt-PKM2信號通路影響30-48
• 3.1 實驗材料30-34
• 3.1.1 細(xì)胞株30
• 3.1.2 主要儀器30-31
• 3.1.3 藥品和試劑31-32
• 3.1.4 試劑配置方法32-34
• 3.1.5 藥品配置方法34
• 3.2 實驗方法34-37
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)34
• 3.2.2 ATP檢測34-35
• 3.2.3 細(xì)胞內(nèi)pH檢測35-36
• 3.2.4 羅丹明123檢測線粒體膜電位36
• 3.2.5 Western blot檢測蛋白表達(dá)36-37
• 3.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析37
• 3.3 實驗結(jié)果37-45
• 3.3.1 FFJ-5 降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)EGFR/Akt蛋白表達(dá)及活性37-38
• 3.3.2 FFJ-5 降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)PKM2蛋白的表達(dá)38-39
• 3.3.3 FFJ-5 降低腫瘤細(xì)胞ATP的水平39-40
• 3.3.4 FFJ-5 降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)的pH40-42
• 3.3.5 FFJ-5 降低腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡42-44
• 3.3.6 FFJ-5 調(diào)控凋亡蛋白表達(dá)44-45
• 3.4 討論45-47
• 3.5 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54-55

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