發(fā)布時(shí)間：2017-10-18 21:43

  本文關(guān)鍵詞：曲尼司特對(duì)高糖培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞增殖及表型轉(zhuǎn)化的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 曲尼司特 高糖 心肌成纖維細(xì)胞 肌成纖維細(xì)胞 ALK7

【摘要】：目的研究曲尼司特(Tranilast,Tra)對(duì)高糖(High glucose,HG)培養(yǎng)乳鼠心肌成纖維細(xì)胞(Cardiac fibroblast,CFs)增殖及表型轉(zhuǎn)化的作用及其作用機(jī)制。方法選用1~3天Sprague-Dawley(SD)大鼠,用75%乙醇浸泡消毒,在無(wú)菌條件下開(kāi)胸取出心臟,消化,貼壁培養(yǎng),CFs長(zhǎng)至融合時(shí)消化、以1:2傳代,實(shí)驗(yàn)用2~3代細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組為:正常對(duì)照組(5.5 mmol·L㧟1葡萄糖);高滲對(duì)照組(葡萄糖5.5 mmol·L㧟1+甘露醇25 mmol·L㧟1);高糖組(25 mmol·L㧟1葡萄糖),曲尼司特干預(yù)組(葡萄糖25 mmol·L㧟1+曲尼司特50μmol·L㧟1,100μmol·L㧟1,200μmol·L㧟1);高糖+活化素受體樣激酶7(Activin receptor-like kinase 7,ALK7)阻斷劑組(葡萄糖25 mmol·L㧟1+10μmol·L㧟1 SB431542)。倒置顯微鏡下及HE染色觀察CFs細(xì)胞形態(tài),并對(duì)培養(yǎng)的CFs進(jìn)行免疫熒光鑒定;噻唑藍(lán)四氮唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法觀測(cè)CFs增殖變化;免疫熒光雙染法觀察FSP-1、α-SMA表達(dá)的變化,鑒定CFs表型轉(zhuǎn)化;Western blots檢測(cè)FSP-1、α-SMA、TGF-β_1、ALK7蛋白表達(dá)。結(jié)果1、形態(tài)學(xué)觀察及免疫學(xué)鑒定:細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞扁平鋪開(kāi),細(xì)胞核比較大,一個(gè)細(xì)胞內(nèi)常常有1~3個(gè)細(xì)胞核,細(xì)胞漿透明,折光弱,無(wú)自發(fā)搏動(dòng),HE染色后可見(jiàn)成纖維細(xì)胞清晰的形態(tài)。免疫熒光染色后只顯示紅色熒光,無(wú)綠色熒光,提示FSP-1染色陽(yáng)性,α-SMA染色陰性,證實(shí)為心肌成纖維細(xì)胞。2、MTT檢測(cè)顯示:與正常對(duì)照組比較,高糖組心肌成纖維細(xì)胞出現(xiàn)明顯增殖,吸光度值升高(P0.01);與高糖組相比,加入不同濃度曲尼司特干預(yù)后,對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的增殖具有顯著抑制作用(P0.05),且曲尼司特干預(yù)組呈劑量依賴性;與高糖組相比,SB431542組細(xì)胞溶液吸光度值明顯降低(P0.05),而高滲對(duì)照組無(wú)顯著性差異。3、免疫熒光法觀測(cè)顯示:與正常對(duì)照組比較,高糖組細(xì)胞內(nèi)FSP-1蛋白表達(dá)減少,α-SMA蛋白表達(dá)明顯增多;與高糖組比較,曲尼司特干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)FSP-1蛋白表達(dá)逐漸增多,α-SMA蛋白表達(dá)逐漸減少;與高糖組比較,SB431542組FSP-1蛋白表達(dá)增多,α-SMA蛋白表達(dá)減少,而高滲對(duì)照組無(wú)顯著性差異。4、Western檢測(cè)顯示:與正常對(duì)照組比較,高糖組FSP-1表達(dá)減少(P0.01),α-SMA表達(dá)增多(P0.01)、TGF-β_1分泌增多(P0.01),ALK7分泌增多(P0.01),高滲對(duì)照組與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異;與高糖組比較,應(yīng)用SB431542及不同濃度曲尼司特同步干預(yù)后,FSP-1表達(dá)明顯增多(P0.05),α-SMA表達(dá)明顯減少(P0.01),TGF-β_1表達(dá)明顯減少(P0.05),ALK7分泌減少(P0.05)。結(jié)論高糖可引起心肌成纖維細(xì)胞增殖及表型轉(zhuǎn)化,TGF-β_1、ALK7參與了其發(fā)展過(guò)程。曲尼司特能抑制高糖培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞增殖及表型轉(zhuǎn)化,其機(jī)制可能與下調(diào)TGF-β_1、ALK7的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：曲尼司特 高糖 心肌成纖維細(xì)胞 肌成纖維細(xì)胞 ALK7
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-9
• 英文縮略語(yǔ)9-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-17
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 附錄34-44
• 一、文獻(xiàn)綜述 TGF-β/Smads信號(hào)通路在心血管疾病中的作用34-41
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 二、在學(xué)期間科研成績(jī)41-42
• 三、致謝42-43
• 四、個(gè)人簡(jiǎn)介43-44

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本文編號(hào)：1057320