本文關(guān)鍵詞：拉莫三嗪共混膠束經(jīng)鼻給藥治療難治性癲癇的研究

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【摘要】：癲癇是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病,起病突然,經(jīng)常造成意外傷害甚至威脅患者生命,我國每年新增癲癇病例約為50萬人,其中約四分之一為難治性癲癇。所謂難治性癲癇,是在診斷明確的前提下,應(yīng)用合適的抗癲癇藥物進(jìn)行合理、正規(guī)的治療,身體內(nèi)的血藥濃度達(dá)到了有效治療范圍,但癲癇的發(fā)病部位藥物濃度較低,未達(dá)到有效治療濃度,無法滿意地控制癲癇病。本課題將癲癇治療藥物拉莫三嗪制備成mPEG-PLA/TPGS共混膠束和mPEG-PLA單一膠束,對其制備工藝、體外釋放行為、大鼠體內(nèi)血藥濃度、海馬部位藥物濃度以及給藥后的組織分布進(jìn)行了全面的研究。本研究選用mPEG-PLA和TPGS為載體材料,采用溶劑揮發(fā)法制備拉莫三嗪mPEG-PLA/TPGS共混膠束。以載藥量為主要評價(jià)指標(biāo),通過單因素實(shí)驗(yàn)考察攪拌時(shí)間、攪拌溫度、攪拌速度、TPGS與mPEG-PLA比例、聚合物濃度、有機(jī)相與水相的比值以及投藥量對載藥量的影響,最終通過五因素四水平的正交實(shí)驗(yàn)確定拉莫三嗪mPEG-PLA/TPGS共混膠束最佳制備工藝:精密稱取20 mg的mPEG-PLA和15 mg拉莫三嗪溶于3 ml甲醇中,攪拌使其完全溶解,此為有機(jī)相。精密稱取8 mg的TPGS溶于16 ml蒸餾水中,此為水相。然后在1200rpm和35℃的攪拌條件下,將有機(jī)相溶液逐滴滴入盛有水相的圓底燒瓶中,繼續(xù)攪拌0.5 h,然后在35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,經(jīng)過濾制得膠束溶液。所得的共混膠束的平均載藥量為39.28%。為了做對比,本研究同時(shí)采用溶劑揮發(fā)法制備拉莫三嗪mPEG-PLA單一膠束,通過單因素實(shí)驗(yàn)考察膠束制備過程中的攪拌時(shí)間、攪拌溫度、攪拌速度、旋蒸溫度、滴加速度、聚合物濃度、有機(jī)相與水相的比值以及投藥量對載藥膠束的載藥量的影響。最后進(jìn)行四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn),得到mPEG-PLA單一膠束的最佳工藝為:精密稱取20 mg的mPEG-PLA和13 mg拉莫三嗪溶于2 ml甲醇中,攪拌使其完全溶解,此為有機(jī)相。然后在1250 rpm和35℃的攪拌條件下,將有機(jī)相溶液逐滴滴入盛有6 ml蒸餾水的圓底燒瓶中,繼續(xù)攪拌1.5 h,然后在35℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,經(jīng)過濾制得膠束溶液。所得的單一膠束的平均載藥量為36.44%。利用激光粒度測定儀考察mPEG-PLA共混膠束和mPEG-PLA/TPGS單一膠束的平均粒徑分別為183.5 nm和122.9 nm。體外釋放結(jié)果表明拉莫三嗪mPEG-PLA/TPGS共混膠束和mPEG-PLA單一膠束的體外釋藥行為符合雙指數(shù)雙相方程,說明二者的釋放分為兩個(gè)階段:先快速釋放后緩慢釋放,共混膠束和單一膠束在12 h時(shí)累計(jì)釋放率分別為82%和89%。為了研究載藥膠束經(jīng)鼻給藥后的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn),本研究建立了微透析采樣技術(shù)聯(lián)合反相高效液相色譜法來檢測拉莫三嗪載藥膠束經(jīng)鼻給藥后在大鼠體內(nèi)的血藥濃度,測定拉莫三嗪共混膠束、拉莫三嗪單一膠束和拉莫三嗪藥物溶液經(jīng)鼻給藥后的血藥濃度經(jīng)時(shí)變化,采用DAS 3.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)拉莫三嗪共混膠束與拉莫三嗪單一膠束相較于藥物溶液,血藥濃度可以在一段時(shí)間內(nèi)維持在一定濃度,起到了緩慢釋藥的作用,其中共混膠束的達(dá)峰時(shí)間比單一膠束快7.5 min、峰濃度比單一膠束高0.06μg·m L-1,共混膠束的AUC0-∞分別是單一膠束的1.50倍、藥物溶液的4.27倍。。同時(shí),本研究還建立了微透析采樣技術(shù)聯(lián)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS)檢測拉莫三嗪載藥膠束經(jīng)鼻給藥后在大鼠海馬部位的濃度,測定拉莫三嗪共混膠束、拉莫三嗪單一膠束和拉莫三嗪藥物溶液經(jīng)鼻給藥后的海馬藥物濃度經(jīng)時(shí)變化,采用DAS 3.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)拉莫三嗪共混膠束與拉莫三嗪單一膠束相較于藥物溶液,大鼠海馬部位的濃度可以在一定時(shí)間段內(nèi)維持在一定濃度,起到了緩慢釋藥的作用,其中共混膠束的達(dá)峰時(shí)間為7.5 min,比單一膠束快20 min、峰濃度比單一膠束高11.3 ng·mL-1,共混膠束AUC0-∞分別是單一膠束的1.78倍、藥物溶液的4.08倍。。最后,本研究建立了反相高效液相色譜法檢測拉莫三嗪在大鼠各組織濃度的方法,測定拉莫三嗪mPEG-PLA經(jīng)鼻給藥和拉莫三嗪藥物溶液灌胃給藥后在大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦各組織中的濃度,并重點(diǎn)對比二者在腦部的濃度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼻腔給予膠束溶液后,大鼠腦組織中拉莫三嗪含量是藥物溶液灌胃組的1.50~1.90倍。綜上所述,將拉莫三嗪制成共混膠束溶液經(jīng)鼻腔給藥來治療癲癇具有前景性。
【關(guān)鍵詞】：癲癇 鼻腔給藥 海馬靶向 拉莫三嗪 膠束 微透析技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943;R96
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• Abstract12-14
• 第一章 前言14-20
• 1 癲癇及其治療現(xiàn)狀14-15
• 2 鼻腔給藥治療腦部疾病的現(xiàn)狀15-16
• 3 膠束及共混膠束16-17
• 4 微透析采樣技術(shù)的研究進(jìn)展17-20
• 第二章 拉莫三嗪載藥膠束的制備20-46
• 1 引言20
• 2 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.1 藥品與試劑20
• 2.2 儀器與設(shè)備20-21
• 3 實(shí)驗(yàn)方法21-28
• 3.1 載藥膠束內(nèi)LTG含量測定方法的建立21-22
• 3.1.1 LTG含量測定波長的選擇21
• 3.1.2 LTG含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制21
• 3.1.3 LTG載藥膠束載藥量及包封率的計(jì)算21-22
• 3.2 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA單一膠束22
• 3.3 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA單一膠束的影響因素考察22-24
• 3.3.1 有機(jī)溶劑與水的比例22
• 3.3.2 有機(jī)相的滴加速度22-23
• 3.3.3 攪拌時(shí)間23
• 3.3.4 攪拌轉(zhuǎn)速23
• 3.3.5 攪拌溫度23
• 3.3.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度23
• 3.3.7 聚合物m PEG-PLA的濃度23-24
• 3.3.8 投藥量24
• 3.4 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA/TPGS共混膠束24
• 3.5 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA/TPGS共混膠束的影響因素考察24-26
• 3.5.1 攪拌時(shí)間24
• 3.5.2 攪拌溫度24-25
• 3.5.3 攪拌轉(zhuǎn)速25
• 3.5.4 有機(jī)溶劑與水的比例25
• 3.5.5 聚合物m PEG-PLA的濃度25
• 3.5.6 m PEG-PLA與TPGS的比例25-26
• 3.5.7 投藥量26
• 3.6 溶劑揮發(fā)法制備LTG單一膠束和LTG共混膠束的正交設(shè)計(jì)26-28
• 4 結(jié)果與分析28-44
• 4.1 載藥膠束內(nèi)LTG含量測定方法的確立28-29
• 4.1.1 LTG含量測定波長的選擇28
• 4.1.2 LTG含量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線28-29
• 4.2 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA單一膠束的影響因素考察29-35
• 4.2.1 有機(jī)溶劑與水的比例29-30
• 4.2.2 有機(jī)相的滴加速度30-31
• 4.2.3 攪拌時(shí)間31-32
• 4.2.4 攪拌轉(zhuǎn)速32-33
• 4.2.5 攪拌溫度33
• 4.2.6 有機(jī)溶劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度33-34
• 4.2.7 聚合物m PEG-PLA濃度34-35
• 4.2.8 投藥量35
• 4.3 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化m PEG-PLA單一膠束的處方35-37
• 4.4 溶劑揮發(fā)法制備m PEG-PLA共混膠束的影響因素考察37-42
• 4.4.1 攪拌時(shí)間37
• 4.4.2 攪拌溫度37-38
• 4.4.3 攪拌轉(zhuǎn)速38
• 4.4.4 有機(jī)溶劑與水的比例38-39
• 4.4.5 聚合物m PEG-PLA的濃度39-40
• 4.4.6 m PEG-PLA與TPGS的比例40-41
• 4.4.7 投藥量41-42
• 4.5 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化m PEG-PLA/TPGS共混膠束的處方42-44
• 5 討論44-46
• 5.1 有機(jī)溶劑的去除44
• 5.2 正交設(shè)計(jì)的選擇44-45
• 5.3 評價(jià)指標(biāo)的選擇45-46
• 第三章 拉莫三嗪載藥膠束的表征及體外釋放的研究46-60
• 1 引言46
• 2 實(shí)驗(yàn)材料46-47
• 2.1 藥品與試劑46
• 2.2 儀器與設(shè)備46-47
• 2.3 樣品的制備47
• 3 實(shí)驗(yàn)方法47-51
• 3.1 LTG載藥膠束的粒徑與粒徑分布測定47
• 3.2 LTG膠束的外觀形貌47
• 3.3 LTG載藥膠束體外釋放含量測定方法的建立47-49
• 3.3.1 膠束體外釋放介質(zhì)的選擇47-48
• 3.3.2 樣品的制備48
• 3.3.3 色譜條件48
• 3.3.4 體外釋放方法專屬性考察48
• 3.3.5 體外釋放標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立48-49
• 3.3.6 體外釋放精密度考察49
• 3.3.7 體外釋放回收率考察49
• 3.4 LTG載藥膠束的體外釋放49
• 3.5 釋藥方程擬合49-51
• 4 結(jié)果與分析51-58
• 4.1 膠束的粒徑與粒徑分布51
• 4.2 膠束的外觀形貌51-52
• 4.3 體外釋放含量測定的方法學(xué)52-56
• 4.3.1 方法專屬性考察52-53
• 4.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立53-54
• 4.3.3 精密度考察54-55
• 4.3.4 回收率考察55-56
• 4.4 膠束的體外釋放56-58
• 5 討論58-60
• 第四章 載藥膠束經(jīng)鼻給藥后的血藥濃度研究60-78
• 1 引言60
• 2 實(shí)驗(yàn)材料60-61
• 2.1 藥品與試劑60
• 2.2 儀器與設(shè)備60-61
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物61
• 3 實(shí)驗(yàn)方法61-66
• 3.1 血液微透析樣品中LTG含量測定方法的建立61-62
• 3.1.1 色譜條件61
• 3.1.2 專屬性考察61
• 3.1.3 線性關(guān)系考察61-62
• 3.1.4 精密度考察62
• 3.1.5 穩(wěn)定性考察62
• 3.1.6 檢測限和定量限考察62
• 3.2 微透析采樣方法的建立62-64
• 3.2.1 體外回收率的校正62-63
• 3.2.2 流速對回收率的影響63
• 3.2.3 濃度對回收率的影響63
• 3.2.4 溫度對回收率的影響63-64
• 3.2.5 體外回收率的穩(wěn)定性64
• 3.2.6 體內(nèi)回收率的校正及其穩(wěn)定性考察64
• 3.3 HPLC聯(lián)合微透采樣技術(shù)測定大鼠血藥濃度64-66
• 3.3.1 動(dòng)物分組64
• 3.3.2 血管探針的植入64-65
• 3.3.3 大鼠血液樣品的采集65
• 3.3.4 數(shù)據(jù)監(jiān)測65-66
• 4 結(jié)果與分析66-75
• 4.1 HPLC測定血液微透析液中LTG含量66-69
• 4.1.1 專屬性考察66-67
• 4.1.2 線性關(guān)系考察67-68
• 4.1.3 精密度考察68-69
• 4.1.4 穩(wěn)定性考察69
• 4.1.5 檢測限和定量限考察69
• 4.2 微透析采樣方法的建立69-73
• 4.2.1 流速對回收率的影響69-70
• 4.2.2 濃度對回收率的影響70-71
• 4.2.3 溫度對回收率的影響71-72
• 4.2.4 體外回收率的穩(wěn)定性72
• 4.2.5 體內(nèi)回收率的測定及其穩(wěn)定性72-73
• 4.3 HPLC聯(lián)合微透采樣技術(shù)測定大鼠血藥濃度73-74
• 4.4 大鼠鼻腔給藥后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算74-75
• 5 討論75-78
• 5.1 探針體外回收率測定的必要性75-76
• 5.2 灌流液的選擇76
• 5.3 體內(nèi)回收率較體外回收率低76
• 5.4 探針的使用次數(shù)76-77
• 5.5 探針膜長的選擇77
• 5.6 共混膠束提高藥物血藥濃度及維持時(shí)間77-78
• 第五章 載藥膠束經(jīng)鼻給藥后的海馬藥物濃度研究78-104
• 1 引言78
• 2 實(shí)驗(yàn)材料78-79
• 2.1 藥品與試劑78
• 2.2 儀器與設(shè)備78-79
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物79
• 2.4 膠束及藥物溶液的制備79
• 3 實(shí)驗(yàn)方法79-87
• 3.1 UPLC-MS測定腦微透析樣品中LTG含量方法的建立79-82
• 3.1.1 溶液的配制79-80
• 3.1.2 樣品處理80-81
• 3.1.3 UPLC-MS條件81-82
• 3.2 UPLC-MS測定腦微透析樣品的方法學(xué)考察82-84
• 3.2.1 專屬性82
• 3.2.2 線性和靈敏度82-83
• 3.2.3 精密度和準(zhǔn)確度83
• 3.2.4 基質(zhì)效應(yīng)(n=5)83
• 3.2.5 提取回收率(n=5)83-84
• 3.3 微透析采樣方法的建立84-85
• 3.3.1 回收率的測定84
• 3.3.2 流速對回收率的影響84
• 3.3.3 藥物濃度對回收率的影響84-85
• 3.3.4 溫度對回收率的影響85
• 3.3.5 體外回收率的穩(wěn)定性考察85
• 3.3.6 體內(nèi)回收率的校正及其穩(wěn)定性考察85
• 3.4 大鼠海馬部位LTG濃度85-87
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組85
• 3.4.2 微透析手術(shù)操作85-86
• 3.4.3 給藥后微透析樣品采集86
• 3.4.4 數(shù)據(jù)監(jiān)測86-87
• 4 結(jié)果與分析87-101
• 4.1 UPLC-MS測定腦脊液樣品中LTG含量方法的建立87-95
• 4.1.1 專屬性87-88
• 4.1.2 線性與靈敏度88-90
• 4.1.3 精密度與準(zhǔn)確度90-93
• 4.1.4 基質(zhì)效應(yīng)93-94
• 4.1.5 提取回收率94-95
• 4.2 微透析采樣方法的建立95-100
• 4.2.1 灌流速度對體外回收率的影響95-96
• 4.2.2 藥物濃度對回收率的影響96-97
• 4.2.3 溫度對回收率的影響97-98
• 4.2.4 體外回收率的穩(wěn)定性考察98-99
• 4.2.5 體內(nèi)回收率的測定及穩(wěn)定性考察99-100
• 4.3 UPLC-MS聯(lián)合微透采樣技術(shù)測定大鼠海馬藥物濃度100
• 4.4 大鼠鼻腔給藥后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算100-101
• 5 討論101-104
• 5.1.UPLC條件的優(yōu)化101-102
• 5.2 液-液萃取條件的優(yōu)化102
• 5.3 探針體內(nèi)回收率比體外回收率小102
• 5.4 微透析測定海馬藥物濃度102-104
• 第六章 載藥膠束經(jīng)鼻給藥后在大鼠體內(nèi)的組織分布研究104-118
• 1 引言104
• 2 實(shí)驗(yàn)材料104-105
• 2.1 藥品與試劑104
• 2.2 儀器與設(shè)備104-105
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物105
• 3 實(shí)驗(yàn)方法105-108
• 3.1 組織樣品中LTG含量測定方法的建立105-107
• 3.1.1 組織樣品的前處理105
• 3.1.2 色譜條件105
• 3.1.3 專屬性考察105-106
• 3.1.4 各組織樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立106
• 3.1.5 精密度考察106
• 3.1.6 回收率考察106-107
• 3.2 大鼠組織分布學(xué)研究107-108
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組107
• 3.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)107-108
• 4 結(jié)果與分析108-116
• 4.1 組織樣品中LTG含量測定方法的建立108-114
• 4.1.1 專屬性考察108-110
• 4.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線110-111
• 4.1.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果111-112
• 4.1.4 回收率112-114
• 4.2 共混膠束的組織分布研究結(jié)果與特點(diǎn)114-116
• 5 討論116-118
• 5.1 對照組拉莫三嗪藥物溶液的配制116-117
• 5.2 載藥膠束鼻腔給藥不具備腦靶向性的原因117-118
• 全文總結(jié)與展望118-121
• 縮寫詞中英文對照121-122
• 參考文獻(xiàn)122-126
• 攻讀碩士學(xué)位期間的成果126-127
• 致謝127

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5 王麗;何大可;張s，

本文編號(hào)：1040110