本文關(guān)鍵詞：NOX4-自噬途徑介導apelin-13促單核細胞—人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附

  更多相關(guān)文章： Apelin-13 NOX4 ROS 自噬 細胞粘附

【摘要】：目的:Apelin作為APJ受體內(nèi)源性配體,具有促單核細胞-內(nèi)皮細胞粘附等多種生物學效應。本實驗前期研究發(fā)現(xiàn),apelin通過PI3K途徑誘導單核細胞向人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附。本課題擬研究apelin-13對人臍靜脈內(nèi)皮細胞中NOX4源ROS和自噬的影響,并在前期研究基礎(chǔ)上進一步探討apelin-13促單核細胞與血管內(nèi)皮細胞粘附的機制,為動脈粥樣硬化的治療提供新的理論依據(jù)。方法:1、Western Blot檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞NOX4、beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、ICAM-1、β-Tublin和β-Actin的表達;2、用DCFH-DA探針檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞ROS的生成,熒光顯微鏡觀察或多功能酶標儀定量檢測;3、m RFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒感染人臍靜脈內(nèi)皮細胞,標記及追蹤細胞內(nèi)LC3,熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)自噬流;4、Calcein AM標記單核細胞,熒光顯微鏡和多功能酶標儀檢測單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附情況;5、Si RNA沉默人臍靜脈內(nèi)皮細胞的beclin-1和LC3,觀察其對細胞粘附的影響。結(jié)果:1、Apelin-13濃度依賴(0-1.0μM)和時間依賴(0-24h)誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞ROS的生成;2、Apelin-13濃度依賴(0-1.0μM)和時間依賴(0-24h)誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞NOX4的表達;3、NOX抑制劑DPI和PI3K阻斷劑LY294002抑制apelin-13誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞ROS的生成;4、Class III PI3K抑制劑3-MA抑制apelin-13(0.1μM,12h)誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞ROS水平和NOX4表達的增加;5、Apelin-13濃度依賴(0-1.0μM)和時間依賴(0-24h)誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬標志蛋白beclin1和LC3-II/I的表達增加;6、Apelin-13誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬流增加,加入自噬溶酶體降解阻斷劑羥基氯喹不可抑制apelin-13誘導的自噬流增加;7、ROS清除劑NAC、過氧化氫的酶類清除劑Catalase和NOX抑制劑DPI抑制了apelin-13誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬標志蛋白beclin1和LC3-II/I表達的增加;8、ROS清除劑NAC和過氧化氫的酶類清除劑Catalase抑制了apelin-13誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞自噬流增加;9、ROS清除劑NAC、過氧化氫的酶類清除劑Catalase、NOX抑制劑DPI和ClassⅢPI3K抑制劑3-MA抑制apelin-13促單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附的作用;10、Beclin1 si RNA和LC3 si RNA抑制apelin-13促單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附;11、自噬誘導劑Rapamycin促進單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附;12、ROS清除劑NAC、過氧化氫的酶類清除劑Catalase、NOX抑制劑DPI和ClassⅢPI3K抑制劑3-MA抑制apelin-13上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附蛋白ICAM-1表達;13、自噬誘導劑Rapamycin上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附蛋白ICAM-1表達。結(jié)論:ClassⅢPI3K-NOX4-ROS-自噬途徑介導apelin-13促單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮粘附。
【關(guān)鍵詞】：Apelin-13 NOX4 ROS 自噬 細胞粘附
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要英文縮略語索引10-14
• 第1章 緒論14-18
• 第2章 實驗材料18-20
• 2.1 實驗細胞18
• 2.2 主要試劑18-19
• 2.3 主要儀器19-20
• 第3章 實驗方法20-24
• 3.1 細胞培養(yǎng)20
• 3.2 實驗分組20-21
• 3.3 Western blot21-22
• 3.4 ROS檢測22
• 3.5 自噬流檢測22
• 3.6 檢測單核細胞-人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附率22-23
• 3.7 SiRNA干擾技術(shù)23
• 3.8 統(tǒng)計學方法23-24
• 第4章 實驗結(jié)果24-48
• 4.1 Apelin-13 誘導 HUVECs 中 ROS 生成24-26
• 4.2 Apelin-13上調(diào)HUVECs中NOX4表達26-27
• 4.3 NOX的抑制劑DPI和PI3K抑制劑LY294002對apelin-13誘導HUVECs中ROS水平上的影響27-29
• 4.4 Class III PI3K抑制劑 3-MA抑制apelin-13誘導HUVECs中ROS水平上升29-31
• 4.5 Class III PI3K抑制劑 3-MA抑制apelin-13上調(diào)HUVECs中NOX4表達31-32
• 4.6 Apelin-13誘導HUVECs中自噬標志蛋白表達增加32-33
• 4.7 Apelin-13誘導HUVECs中自噬流增加33-35
• 4.8 ROS清除劑NAC和過氧化氫的酶類清除劑Catalase抑制apelin-13誘導HUVECs中自噬標志蛋白表達增加35-36
• 4.9 NOX抑制劑DPI抑制apelin-13誘導HUVECs自噬標志蛋白的表達36
• 4.10 ROS途徑介導apelin-13誘導HUVECs自噬流增加36-38
• 4.11 ROS-自噬在apelin-13促MCs-HUVECs粘附中的作用38-43
• 4.12 Apelin-13通過ROS- 自噬途徑上調(diào)HUVECs粘附蛋白ICAM-1 表達43-48
• 第5章 討論48-54
• 第6章 結(jié)論54-56
• 參考文獻56-64
• 綜述64-72
• 文獻翻譯72-80
• 作者攻讀學位期間的科研成果80-82
• 致謝82-83

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李赫寧;NOX4-自噬途徑介導apelin-13促單核細胞—人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附[D];南華大學;2015年

2 柯麗琴;NOX4介導的高糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡及其機制研究[D];南華大學;2008年

，

本文編號：1019071