本文關(guān)鍵詞：體外與體內(nèi)肝細(xì)胞微核檢測方法研究

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【摘要】：目的:分別利用遺傳毒性陽性劑開展體外微核細(xì)胞組學(xué)和SD大鼠體內(nèi)肝細(xì)胞微核試驗(yàn),對2種評價(jià)方法進(jìn)行探討。方法:1體外肝細(xì)胞微核細(xì)胞組學(xué):在無S9代謝活化條件下使用不同濃度環(huán)磷酰胺(CPA,10或40μg·m L-1)或絲裂霉素C(MMC,0.05,0.1或0.2μg·m L-1)與HepaRG或HepG2細(xì)胞作用4或24 h,開展胞質(zhì)分裂阻滯法微核細(xì)胞組學(xué)試驗(yàn)。計(jì)算每個(gè)劑量胞質(zhì)分裂增殖指數(shù)(CBPI)和復(fù)制指數(shù)(RI)、壞死(Nec)和凋亡(Apop)細(xì)胞的千分率以及雙核細(xì)胞中微核(MN)、核芽(NBUD)和核質(zhì)橋(NPB)出現(xiàn)的千分率。2體內(nèi)骨髓微核與肝微核試驗(yàn):使用6~7周齡SD大鼠,連續(xù)3 d分別在0,24和45 h經(jīng)口灌胃dd H2O,CPA(10,20或40 mg·kg-1)或EMS(200 mg·kg-1)。末次給藥后取單側(cè)股骨和肝左葉中間約5 mm3大小組織分別制作骨髓和肝細(xì)胞微核涂片。鏡檢計(jì)數(shù)每組動(dòng)物的嗜多染紅細(xì)胞微核率(MNPCE‰)和肝細(xì)胞微核率(LMN‰)的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果:1 HepaRG細(xì)胞經(jīng)CPA或MMC處理可見MN‰,NBUD‰及NPB‰呈劑量相關(guān)性增加,中高劑量組與對照組比較有顯著差異(P0.05或P0.01);HepG2細(xì)胞NBUD‰和NPB‰背景值較高,在高背景值的基礎(chǔ)上經(jīng)CPA或MMC處理均見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著增加,且增加幅度較大(P0.01);MMC處理組以上2項(xiàng)指標(biāo)的增幅較CPA處理組更顯著。NPB‰不是HepG2細(xì)胞的染色體損傷敏感指標(biāo)。2連續(xù)3 d經(jīng)口灌胃CPA或EMS均可引起SD大鼠MNPCE‰和LMN‰升高。結(jié)論:利用HepaRG開展體外微核細(xì)胞組學(xué),可在不添加S9的條件下經(jīng)陽性劑CPA或MMC處理4 h獲得陽性結(jié)果,是開展體外肝細(xì)胞微核試驗(yàn)的理想研究對象。體內(nèi)肝細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)的敏感性和特異性較好,該方法與SD大鼠重復(fù)給藥毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)合,可對藥物肝毒和遺傳毒性進(jìn)行綜合預(yù)測。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院國家藥物安全評價(jià)監(jiān)測中心藥物非臨床安全評價(jià)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： HepaRG HepG 微核細(xì)胞組學(xué) 胞質(zhì)分裂阻滯微核 肝微核
【基金】：中國食品藥品檢定研究院中青年發(fā)展研究基金課題(2014C1)
【分類號】：R965
【正文快照】： 肝臟是藥物代謝的主要器官。隨著藥物品種日漸繁多,藥源性肝損害已成為藥物相關(guān)不良反應(yīng)之首[1]。然而,傳統(tǒng)遺傳毒性研究方法多采用特殊菌株、細(xì)胞系和較為敏感的檢測終點(diǎn),主要作為藥物間接毒性的早期預(yù)測手段,但與藥物誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的靶器官的關(guān)聯(lián)度不高[2]。永生化肝細(xì)胞系較

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1 樓宜嘉;陳哲;;細(xì)胞組學(xué)與藥理毒理學(xué)研究新機(jī)遇[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

2 王晨;趙長琦;王莉莉;;細(xì)胞組學(xué)在新藥研發(fā)中的應(yīng)用[J];國際藥學(xué)研究雜志;2009年06期

3 ;[J];;年期

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本文編號：1012602