本文關(guān)鍵詞：1、新型化合物FLZ通過(guò)調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機(jī)制研究 2、去氫丹參新酮對(duì)神經(jīng)炎癥的抑制作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 高遷移率族蛋白B1 FLZ 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞 NF-κB 帕金森氏病 去氫丹參新酮 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞 NF-κB PI3K/AKT

【摘要】：高遷移率族蛋白B1 (high mobility group box 1, HMGB1)是一種高度保守的核蛋白,廣泛存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi),參與核小體的形成并調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),HMGB1也是一種重要的炎癥介質(zhì),與感染、膿毒血癥、關(guān)節(jié)炎等多種.炎癥相關(guān)疾病的病理過(guò)程密切相關(guān),當(dāng)組織或細(xì)胞受到損傷時(shí)被分泌到胞外,引起或加重炎癥反應(yīng),但與其他早期釋放的炎癥因子如腫瘤壞死因子,白介素等不同,HMGB1是一種晚期釋放的炎癥因子,這使得以HMGB1為靶點(diǎn)進(jìn)行的藥物治療研究具有十分重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。FLZ是從天然產(chǎn)物中提取出的番荔枝酰胺經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)改造的新化合物,臨床前研究發(fā)現(xiàn)FLZ對(duì)多種體內(nèi)外帕金森氏病模型均具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。FLZ能明顯抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度激活,抑制炎癥因子的釋放,通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥而間接保護(hù)神經(jīng)元。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)FLZ具有很好的抗炎活性,但其詳細(xì)的作用機(jī)制尚不明確,有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)FLZ調(diào)控HMGB1相關(guān)信號(hào)通路的作用機(jī)制進(jìn)行研究和探討,以期明確FLZ抑制神經(jīng)炎癥作用的機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)抑制HMGB1的釋放過(guò)程、抑制IMGB1與受體的結(jié)合過(guò)程以及抑制HMGB1與受體結(jié)合后引起的炎癥信號(hào)通路的激活均可以抑制HMGB1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),因此,我們通過(guò)Western blot和ELISA檢測(cè)FLZ對(duì)]1MGB1的轉(zhuǎn)移和釋放過(guò)程的影響,通過(guò)Confocal進(jìn)一步觀察FLZ對(duì)HMGB1的轉(zhuǎn)移過(guò)程的影響,通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)FLZ對(duì)HMGB1與其相應(yīng)受體的結(jié)合過(guò)程的影響,最后檢測(cè)FLZ對(duì)HMGB1刺激BV2細(xì)胞引起的炎癥因子NF-α釋放量的影響及TLR4/MyD88/NF-KB信號(hào)通路的影響。結(jié)果顯示,靜息狀態(tài)下HMGB1大量存在于巨噬細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi),在LPS的刺激下向胞漿轉(zhuǎn)移并逐漸釋放到胞外。FLZ可劑量依賴(lài)性的抑制BV2細(xì)胞中HMGB1蛋白從胞核向胞漿的轉(zhuǎn)位過(guò)程并減少神經(jīng)炎癥反應(yīng)中]SMGB1的釋放量。釋放到胞外的HMGB1通過(guò)與其相應(yīng)受體結(jié)合而傳遞炎癥信號(hào),TLR4和TLR2是參與識(shí)別HMGB1的兩個(gè)主要受體,對(duì)]3MGB1與其受體結(jié)合過(guò)程的研究發(fā)現(xiàn),FLZ對(duì)HMGB1與TLR4受體的結(jié)合過(guò)程沒(méi)有明顯影響,FLZ對(duì)]HMGB1與TLR2的結(jié)合過(guò)程的影響尚在研究之中。HMGB1與TLR4受體結(jié)合后可以激活TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路,引起髓樣分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)的表達(dá)升高、蛋白激酶IKKα和IκBα的磷酸化及NF-κB的核內(nèi)轉(zhuǎn)移進(jìn)而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。我們發(fā)現(xiàn)FLZ對(duì)HMGB1誘發(fā)的MyD88表達(dá)升高具有明顯的抑制作用,同時(shí)可顯著抑制KKα和IκBα的磷酸化及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活,對(duì)]HMGB1刺激BV2細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子TNF-α的釋放具有顯著的抑制作用。以上結(jié)果表明,HMGB1蛋白在神經(jīng)炎癥反應(yīng)中具有重要的作用,FLZ對(duì)HMG1B1介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)具有明顯的抑制作用,這主要是與其可以抑制HMGB1的轉(zhuǎn)位和釋放以及抑制TLR4/MyD88/NF-KB信號(hào)通路的激活進(jìn)而減輕HMGB1的致炎作用有關(guān)。因此,HMGB1可能是FLZ發(fā)揮抗炎作用的一個(gè)重要靶點(diǎn),FLZ通過(guò)抑制HMGB1介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫應(yīng)答反應(yīng),主要由腦內(nèi)免疫細(xì)胞小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞引起。當(dāng)腦組織在各種病理情況下受到損傷或刺激時(shí),小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞可由靜息態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài),吞噬清除變性的神經(jīng)組織碎片。此外,激活的膠質(zhì)細(xì)胞還會(huì)釋放大量的炎癥因子如腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-6(lnterleukin-6, IL-6)和一氧化氮(nitric oxide, NO)等,參與腦內(nèi)微環(huán)境的調(diào)節(jié),但是過(guò)度激活的膠質(zhì)細(xì)胞和過(guò)量釋放的炎癥因子也會(huì)對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生毒性作用,導(dǎo)致神經(jīng)元功能喪失、變性甚至死亡。因此神經(jīng)炎癥與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過(guò)程均密切相關(guān),如在阿爾茲海默癥及帕金森氏病患者腦內(nèi)均可見(jiàn)到以小膠質(zhì)細(xì)胞激活為代表的神經(jīng)炎癥反應(yīng)的存在。研究發(fā)現(xiàn)抑制膠質(zhì)細(xì)胞激活的藥物有助于緩解該類(lèi)疾病的癥狀,提示抗炎治療對(duì)該類(lèi)疾病有效。去氫丹參新酮是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥丹參中提取的一種活性成分,已有報(bào)道其在急性肝損傷中具有顯著的抗炎作用,但是其是否具有抑制神經(jīng)炎癥的作用還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中,我們采用經(jīng)典致炎劑脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激一種鼠源的小膠質(zhì)細(xì)胞--BV2細(xì)胞,制造體外炎癥模型來(lái)研究去氫丹參新酮對(duì)神經(jīng)炎癥的抑制作用并初步探討其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示去氫丹參新酮可以顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞表面活化標(biāo)志物CD11b的表達(dá)增加,表明其具有明顯的抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活的作用。同時(shí),去氫丹參新酮對(duì)LPS刺激BV2細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子TNF-α, IL-6以及NO的生成均有明顯的抑制作用。此外,去氫丹參新酮對(duì)相關(guān)炎癥因子蛋白合成酶如誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)的表達(dá)也有顯著的抑制作用。在明確了去氫丹參新酮的抗炎作用之后,我們對(duì)去氫丹參新酮的抗炎作用機(jī)制進(jìn)行了初步的研究。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-Kinase, PI3K)信號(hào)參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)等多種功能的調(diào)節(jié)。近年來(lái)發(fā)現(xiàn),PI3K及其下游分子AKT所組成的信號(hào)通路也參與了對(duì)炎癥的調(diào)節(jié),活化的AKT可以激活NF-κB信號(hào)通路,進(jìn)而激活其靶基因促進(jìn)多種炎癥因子的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示去氫丹參新酮可以抑制PI3K和AKT的磷酸化,減少I(mǎi)r,B的降解,抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。這些結(jié)果表明去氫丹參新酮可能是通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路抑制了NF-κB的激活,減輕下游炎癥因子的釋放,進(jìn)而抑制神經(jīng)炎癥。綜上所述,去氫丹參新酮具有較好的抗神經(jīng)炎癥活性,有望開(kāi)發(fā)成為新型的神經(jīng)保護(hù)劑,但其成藥性和作用機(jī)制還需要進(jìn)行更加深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白B1 FLZ 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞 NF-κB 帕金森氏病 去氫丹參新酮 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞 NF-κB PI3K/AKT
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 新型化合物FLZ通過(guò)調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機(jī)制研究12-33
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-26
• 1. LPS刺激BV2細(xì)胞引起HMGB1的釋放19-20
• 2. FLZ抑制HMGB1的出核過(guò)程20-21
• 3. FLZ抑制HMGB1的出胞過(guò)程21-22
• 4. FLZ對(duì)HMGB1與TLR4受體的結(jié)合沒(méi)有影響22-23
• 5. FLZ減少rHMGB1刺激BV2細(xì)胞引起的TNF-α生成23-24
• 6. FLZ抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路的激活24-26
• 討論26-28
• 小結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 第二部分 去氫丹參新酮對(duì)神經(jīng)炎癥的抑制作用及機(jī)制研究33-48
• 前言33-34
• 材料和方法34-38
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-43
• 1. 去氫丹參新酮對(duì)BV2細(xì)胞24 h存活率的影響38
• 2. 去氫丹參新酮抑制LPS刺激BV2細(xì)胞引起的NO釋放38-39
• 3. 去氫丹參新酮減少炎癥因子TNF-α和IL-6的生成39-40
• 4. 去氫丹參新酮抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活40-41
• 5. 去氫丹參新酮抑制炎癥蛋白iNOS和COX-2的表達(dá)41
• 6. 去氫丹參新酮抑制NF-κB信號(hào)通路的激活41-42
• 7. 去氫丹參新酮抑制PI3K p85亞基和AKT的磷酸化42-43
• 討論43-45
• 小結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 文獻(xiàn)綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59-60

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 羅厚蔚,胡曉潔,王寧,紀(jì)江;丹參中抑制血小板聚集的活性成分[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1988年11期

2 ;[J];;年期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李德川;1、新型化合物FLZ通過(guò)調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機(jī)制研究 2、去氫丹參新酮對(duì)神經(jīng)炎癥的抑制作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

2 章敏;丹參中具有醌還原酶誘導(dǎo)活性化合物的發(fā)現(xiàn)[D];浙江大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1008706