本文關(guān)鍵詞：小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞向內(nèi)耳毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)元誘導(dǎo)分化的體外實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景： 感音神經(jīng)性耳聾是耳鼻咽喉科常見疾病，研究證實(shí)其病理變化主要是耳蝸毛細(xì)胞及與其相連的螺旋神經(jīng)元的缺失。同時(shí)也有研究顯示哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)元受損后再生十分困難。如果能夠找到某種方法修復(fù)缺失的毛細(xì)胞或螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，就有希望治愈感音神經(jīng)性耳聾。2006年，日本科學(xué)家Shinya Yamanaka等通過(guò)導(dǎo)入Oct3/4，Sox2，c-Myc，Klf4四個(gè)外源基因?qū)⑿∈篌w細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(iPSCs)。多項(xiàng)研究證實(shí)，iPSCs具有與胚胎干細(xì)胞(ESCs)類似的分化能力，卻可以避免ESCs的免疫排斥及倫理道德問(wèn)題，因此我們將iPSCs在體外誘導(dǎo)分化為耳蝸毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)元，，為感音神經(jīng)性耳聾的治療的開辟新的道路。 研究?jī)?nèi)容和方法： 1.iPSCs的培養(yǎng)與鑒定：取小鼠胚胎成纖維細(xì)胞作飼養(yǎng)層，iPSCs接種于飼養(yǎng)層上胰酶消化傳代，倒置顯微鏡下觀察iPSCs生長(zhǎng)狀態(tài)，觀察擬胚體(EB)形成能力，RT-PCR檢測(cè)iPSCs多能性基因Oct4, Nanog, Sox2的表達(dá)情況。 2. iPSCs與耳蝸Corti氏器共培養(yǎng)及其分化細(xì)胞的鑒定：分離小鼠耳蝸Corti氏器，將iPSCs與耳蝸Corti氏器共培養(yǎng)。對(duì)分化細(xì)胞用毛細(xì)胞的標(biāo)志物（MyosinVIIA，Math1，Calretinin，Espin）進(jìn)行免疫組化鑒定。 3.iPSCs與耳蝸蝸軸共培養(yǎng)及其分化細(xì)胞的鑒定：分離小鼠耳蝸蝸軸，將iPSCs與耳蝸蝸軸共培養(yǎng)，對(duì)分化細(xì)胞用神經(jīng)元的標(biāo)志物(Nestin、Neurofilament-M、β-Ⅲ Tubulin，Vesicular glutamate transporter1(VGluT1))進(jìn)行免疫組化鑒定。 結(jié)果： 1.成功建立穩(wěn)定的iPSCs培養(yǎng)體系，iPSCs體外培養(yǎng)可形成EB。 RT-PCR顯示iPSCs表達(dá)多能性基因Oct4, Nanog, Sox2。 2.iPSCs與耳蝸Corti氏器共培養(yǎng)18天后可得到表達(dá)毛細(xì)胞標(biāo)志蛋白MyosinVIIA，Math1，Calretinin，Espin的細(xì)胞。 3.iPSCs與耳蝸蝸軸共培養(yǎng)18天后可得到表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志蛋白Nestin、Neurofilament-M、β-Ⅲ Tubulin，VGluT1的細(xì)胞。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)成功建立穩(wěn)定的小鼠iPSCs培養(yǎng)體系；共培養(yǎng)方法可成功將iPSCs誘導(dǎo)分化為耳蝸毛細(xì)胞樣及螺旋神經(jīng)元樣細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞 毛細(xì)胞 螺旋神經(jīng)元 細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R764.431
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-7
• 目錄7-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞系13
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑13-15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要培養(yǎng)基和試劑的配制15
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器與耗材15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-24
• 2.2.1 器材的準(zhǔn)備16-17
• 2.2.2 原代 MEF 的分離培養(yǎng)與凍存17-18
• 2.2.3 MEF 的復(fù)蘇、傳代及飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備18-19
• 2.2.4 小鼠 iPSCs 的復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)及凍存19-20
• 2.2.5 小鼠 iPSCs 的鑒定20-22
• 2.2.6 小鼠 iPSCs 向內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)元誘導(dǎo)分化22-24
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-30
• 3.1 MEF 的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)25
• 3.2 小鼠 iPSCs 的生長(zhǎng)特點(diǎn)25
• 3.3 擬胚體的生長(zhǎng)特點(diǎn)25-26
• 3.4 細(xì)胞經(jīng)共培養(yǎng)誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)26
• 3.5 誘導(dǎo)后細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)26-27
• 3.5.1 內(nèi)耳毛細(xì)胞誘導(dǎo)分化組毛細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物的免疫學(xué)鑒定結(jié)果26
• 3.5.2 螺旋神經(jīng)元誘導(dǎo)分化組神經(jīng)元相關(guān)標(biāo)志物的免疫學(xué)鑒定結(jié)果26-27
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果27-30
• 3.6.1 毛細(xì)胞誘導(dǎo)分化組細(xì)胞陽(yáng)性率及其統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 3.6.2 螺旋神經(jīng)元誘導(dǎo)分化組細(xì)胞陽(yáng)性率及其統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-30
• 第4章 討論30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 附錄 實(shí)驗(yàn)圖片38-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述49-57
• 參考文獻(xiàn)55-57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉謙虛;謝鼎華;陳觀貴;;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞初步觀察[J];聽力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2009年03期

2 江紅群;王正敏;沈云珍;李雯;;新生大鼠耳蝸增殖細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及超微結(jié)構(gòu)觀察[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2007年01期

3 鄭鴻燕;邰浩清;曾水林;周春祥;詹臻;王明艷;;耳蝸提取液誘導(dǎo)海馬神經(jīng)干細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2006年05期

本文編號(hào)：904909