發(fā)布時間：2017-08-05 12:08

  本文關(guān)鍵詞：人肝細(xì)胞生長因子基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及其在成肌干細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 人肝細(xì)胞生長因子 慢病毒 喉肌 成肌干細(xì)胞

【摘要】：目的構(gòu)建人肝細(xì)胞生長因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因重組pCMV-G㤘NR-U6-hHGF慢病毒載體,并檢測其在成肌干細(xì)胞系C2C12細(xì)胞中的hHGF表達(dá),為治療失神經(jīng)喉肌纖維化的研究提供依據(jù)。方法采用RT-PCR法擴(kuò)增并純化得到hHGF基因片段,并將其克隆到pCMV-G㤘NR-U6上,再將重組慢病毒載體轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌DH5α,篩選陽性菌落并行BamHI和HindⅢ雙酶切鑒定。對篩選后的重組質(zhì)粒陽性克隆行PCR鑒定和測序,將表達(dá)質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞包裝hHGF慢病毒,熒光顯微鏡檢測病毒滴度,再進(jìn)一步轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞(分為空白對照組、空載體組、HGF重組慢病毒過表達(dá)組),最后行PCR和WB檢測HGF的表達(dá)情況。結(jié)果 PCR鑒定和測序結(jié)果顯示所構(gòu)建的慢病毒載體正確無誤,包裝后的病毒滴度1×109 IU/mL;慢病毒過表達(dá)組的HGF表達(dá)量均較空白對照組、空載體組明顯增高,而且72h仍有穩(wěn)定的表達(dá)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了慢病毒載體pCMV-G㤘NR-U6-hHGF,并能夠在離體培養(yǎng)的成肌干細(xì)胞系C2C12細(xì)胞中穩(wěn)定高效表達(dá)HGF,為治療失神經(jīng)喉肌等骨骼肌纖維化、提高神經(jīng)修復(fù)效果的實(shí)驗(yàn)研究提供了依據(jù)。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;
【關(guān)鍵詞】： 人肝細(xì)胞生長因子 慢病毒 喉肌 成肌干細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81070774/H1302)資助
【分類號】：R767.62
【正文快照】： 聲帶麻痹多由于喉返神經(jīng)損傷所致,雖然通過修復(fù)喉返神經(jīng)治療取得了較好的療效[1],但隨著失神經(jīng)時間的延長,細(xì)胞外基質(zhì)成分不斷聚積,喉肌內(nèi)肌肉成分和結(jié)締組織構(gòu)成比例會發(fā)生改變,導(dǎo)致失神經(jīng)喉肌萎縮纖維化并最終喪失肌功能,直接影響晚期喉返神經(jīng)修復(fù)術(shù)的效果。肝細(xì)胞生長因子(

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 薛榮;唐軍棟;張宏偉;劉巖;肖芳;王獻(xiàn)華;;血管生成素樣蛋白4在肺纖維化過程中的作用[J];中國職業(yè)醫(yī)學(xué);2014年01期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉雨;高穎娜;湯維芳;李孟;鄭宏良;;不同生長基質(zhì)對骨骼肌成肌干細(xì)胞分化融合的影響及初步分析[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2014年05期

2 ;[J];;年期

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7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉幸卉;黃維一;陳榮;馮利強(qiáng);廖華;余磊;曾慧君;;神經(jīng)元樣細(xì)胞對體外培養(yǎng)成肌干細(xì)胞功能活性的影響[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

2 陳東輝;鄭宏良;陳世彩;劉菲;王偉;;長期失神經(jīng)支配人喉肌成肌干細(xì)胞功能調(diào)控的研究[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 艾鶴英;體外三維培養(yǎng)成肌干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：624801