發(fā)布時間：2017-07-08 09:19

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒載體介導(dǎo)TLR2基因干擾大鼠角膜上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的實驗研究

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【摘要】：目的觀察慢病毒載體(lentiviral vector,LV)介導(dǎo)TLR2基因干擾大鼠角膜上皮細(xì)胞(corneal epithelial cell,CEC)和基質(zhì)細(xì)胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性。方法分別培養(yǎng)大鼠CEC和CSC,轉(zhuǎn)染組用攜帶綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干擾RNA(small interference RNA,siRNA)的LV轉(zhuǎn)染,空白對照組加入空白培養(yǎng)液,陰性對照組加入不攜帶目的基因的LV。轉(zhuǎn)染組按最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)分別為10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,選擇eGFP表達(dá)最強(qiáng)的MOI進(jìn)行后續(xù)實驗,觀察細(xì)胞形態(tài),CCK8檢測細(xì)胞增殖情況。流式細(xì)胞儀檢測兩種角膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后TLR2 mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果 MOI=200時轉(zhuǎn)染CEC和CSC熒光表達(dá)最高,和空白對照組相比細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯改變;CCK8結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組與空白對照組、陰性對照組的IOD值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.05);流式細(xì)胞儀檢測CEC和CSC轉(zhuǎn)染效率分別為77.600% ±1.100%和76.300% ±1.387%,和陰性對照組相比差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.001)。RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后CEC和CSC TLR2 mRNA相對表達(dá)量均較對照組明顯下降,差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.001)。結(jié)論 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在體外穩(wěn)定有效轉(zhuǎn)染CEC和CSC,且對細(xì)胞安全性無影響,可有效下調(diào)TLR2 mRNA的表達(dá)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院眼科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒載體 基因轉(zhuǎn)染 角膜細(xì)胞 TLR
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(編號:81170887) 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院橫向課題匹配基金資助(編號:G201202)~~
【分類號】：R772.2
【正文快照】： 角膜移植是機(jī)體內(nèi)成功率最高的移植手術(shù)之一。穿透性角膜移植術(shù)中角膜上皮細(xì)胞(corneal ep-ithelial cell,CEC)和角膜基質(zhì)細(xì)胞(corneal stromal cell,CSC)的穩(wěn)態(tài)對實現(xiàn)術(shù)后正常的視功能、維持眼表完整性起到重要作用。已有研究顯示,TLR2可通過特異性識別內(nèi)源性及外源性配體,

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本文編號：533909